Navegação IPEN por assunto "zika virus"

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  • IPEN-DOC 25191

    SILVA, CLEIDE M.R. da ; CHURA-CHAMBI, ROSA M. ; PEREIRA, LENNON R.; CORDEIRO, YRAIMA; FERREIRA, LUIS C. de S.; MORGANTI, LIGIA . Association of high pressure and alkaline condition for solubilization of inclusion bodies and refolding of the NS1 protein from zika virus. BMC Biotechnology, v. 18, n. 78, 2018. DOI: 10.1186/s12896-018-0486-2

    Abstract: Background: Proteins in inclusion bodies (IBs) present native-like secondary structures. However, chaotropic agents at denaturing concentrations, which are widely used for IB solubilization and subsequent refolding, unfold these secondary structures. Removal of the chaotropes frequently causes reaggregation and poor recovery of bioactive proteins. High hydrostatic pressure (HHP) and alkaline pH are two conditions that, in the presence of low level of chaotropes, have been described as non-denaturing solubilization agents. In the present study we evaluated the strategy of combination of HHP and alkaline pH on the solubilization of IB using as a model an antigenic form of the zika virus (ZIKV) non-structural 1 (NS1) protein. Results: Pressure-treatment (2.4 kbar) of NS1-IBs at a pH of 11.0 induced a low degree of NS1 unfolding and led to solubilization of the IBs, mainly into monomers. After dialysis at pH 8.5, NS1 was refolded and formed soluble oligomers. High (up to 68 mg/liter) NS1 concentrations were obtained by solubilization of NS1-IBs at pH 11 in the presence of arginine (Arg) with a final yield of approximately 80% of total protein content. The process proved to be efficient, quick and did not require further purification steps. Refolded NS1 preserved biological features regarding reactivity with antigen-specific antibodies, including sera of ZIKV-infected patients. The method resulted in an increase of approximately 30-fold over conventional IB solubilization-refolding methods. Conclusions: The present results represent an innovative non-denaturing protein refolding process by means of the concomitant use of HHP and alkaline pH. Application of the reported method allowed the recovery of ZIKV NS1 at a condition that maintained the antigenic properties of the protein.

    Palavras-Chave: zika virus; proteins; viral diseases; hydrostatics; pressure dependence; high pressure; ph value; alkaline hydrolysis

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  • IPEN-DOC 26636

    SANTOS, DAVID P. dos . Renaturação da proteína de envelope do vírus da zika e do domínio III da mesma proteína utilizando altas pressões / Refolding of zika virus envelope protein and domain III of the same protein using high pressures . 2018. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. 60 p. Orientador: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias. DOI: 10.11606/D.85.2020.tde-03022020-094942

    Abstract: Grande parte das proteínas de importância biomédica são encontradas em concentrações pequenas nas suas formas nativas. Uma alternativa para obtenção de proteínas em grande escala é síntese por bactérias Escherichia coli geneticamente modificadas. Entretanto, frequentemente essas proteínas são produzidas como agregados insolúveis e inativos, denominados de corpos de inclusão (CI). Para se tornarem bioativas as proteínas nos CI devem ser renaturadas. O nosso objetivo foi o estabelecimento de um processo rápido e eficiente de obtenção da proteína de envelope (E) e do domínio III desta mesma proteína (EDIII) do vírus da ZIKA (ZIKV) solúveis e com atividade imunológica a partir de CI. A utilização destas proteínas se justifica pela sua relevância para o desenvolvimento de ensaios diagnósticos e para a produção de vacinas de ZIKV. A associação de alta pressão e pH alcalino se mostrou eficiente para a solubilização dos CI. A incubação dos CI em alta pressão (2,4 kbar por 90 min e 0,4 kbar por 14,5 h) em pH de 10,5 foi a melhor condição encontrada na qual foi obtida solubilização eficiente dos CI com baixa desnaturação proteica. O enovelamento das proteínas presentes nos sobrenadantes das suspensões submetidas à alta pressão foi obtido por diálise em tampão em pH de 8,5. A recuperação do E solúvel nesta condição foi de mais de 90% e a de EDIII foi de 80% em relação às quantidades totais dessas proteínas nos CI e os rendimentos foram de 130 mg de E e de 35 mg de EDIII/L de cultura bacteriana. As proteínas E e EDIII permaneceram imunologicamente ativas e foram recuperadas principalmente como monômeros e dímeros. O procedimento proposto representa uma alternativa para a produção de proteínas recombinantes imunologicamente ativas expressas como CI.

    Palavras-Chave: zika virus; molecular biology; elementary particles; proteins; bacterial spores; cell cultures; pressure range mega pa 10-100; immunotherapy; micellar systems; biotechnology

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Autor: Maprelian

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Ano de publicação: 2015

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