MARCOS VINICIUS NUCCI CAPONE

MARCOS VINICIUS NUCCI CAPONE

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Analise da expressao de prolactina humana em celulas CHO tratadas com butirato de sodio
2010 - CAPONE, MARCOS V.N.; SOARES, CARLOS R.J.
Expression, purification, and characterization of a CHO-derived mouse prolactin receptor antagonist S177D-mPRL produced in serum-free medium
2012 - SUZUKI, M.F.; ARTHUSO, F.S.; OLIVEIRA, J.E; CAPONE, M.V.N.; OLIVEIRA, N.A.J.; RIBELA, M.T.C.P.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.J.
Purification of glycosylated human prolactin from CHO cells adapted to serum-free suspension culture, by reverse=phase HPLC
2012 - CAPONE, M.V.N.; OLIVEIRA, J.E; ARTHUSO, F.S.; SUZUKI, M.F.; SILVA, A.B.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.J.
A comparison between the oligosaccharide structures of native and recombinant glycosylated human prolactin obtained from CHO cells
2013 - CAPONE, M.V.N.; SUZUKI, M.F.; OLIVEIRA, J.E.; BATOLINI, P.; SOARES, C.R.J.
Caracterização da estrutura oligossacarídica de prolactina glicosilada humana (G-hPRL) nativa e recombinante
2013 - CAPONE, MARCOS V.N.
A prolactina humana (hPRL) é um hormônio polipeptídico secretado pela hipófise anterior sob regulação do hipotálamo, envolvido em uma variedade de processos biológicos como o desenvolvimento da glândula mamária e lactação. O produto recombinante é importante no diagnóstico médico e no tratamento de insuficiência da lactação. Este hormônio pode ocorrer sob a forma de proteína não glicosilada (NG-hPRL) e glicosilada (G-hPRL), com pesos moleculares de aproximadamente 23 e 25 kilodalton (kDa), respectivamente; possui um único sítio de N-glicosilação localizado na asparagina (Asn) posição 31, que é parcialmente ocupado, representando assim um modelo particularmente interessante de glicosilação. A atividade biológica da G-hPRL é muito menor comparada à NG-hPRL (~4 vezes) e sua função fisiológica ainda não é bem definida: a porção de carboidrato parece ter um importante papel na biossíntese, secreção, atividade biológica, e sobrevivência plasmática do hormônio. O objetivo principal desse trabalho foi comparar as estruturas dos N-glicanos presentes na prolactina glicosilada hipofisária (G-hPRL-NHPP) com a recombinante. Para obter a G-hPRL recombinante foi realizada uma produção em escala laboratorial a partir de células de ovário de hamster chinês (CHO) geneticamente modificadas e adaptadas ao crescimento em suspensão. Foi adicionada, ao meio de cultura cicloheximida (CHX), cujo efeito principal foi aumentar a relação G-hPRL/NGhPRL que passou de 5% para 38%, facilitando assim a purificação da G-hPRL. A G-hPRL foi purificada em duas etapas, uma troca catiônica seguida de purificação por cromatografia liquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC) que se demonstrou eficiente na separação das duas isoformas de hPRL. A G-hPRL recombinante IPEN foi assim analisada por diversas técnicas confirmando a sua pureza e atividade biológica, incluindo comparações com outras amostras de referências de origem hipofisária adquirida junto ao National Hormone & Peptide Program (NHPP-E.U.A.) . Foi realizada também a determinação inédita de Nglicanos presentes na G-hPRL produzida por células CHO e na G-hPRL nativa, produzida pela hipófise humana, possibilitando comparar as duas estruturas de carboidratos e alcançando assim uma das principais metas desse projeto. Entre as principais diferenças encontradas nas estruturas dos dois N-glicanos, destacam-se a baixa quantidade de ácido siálico (NeuAc), a alta porcentagem de glicanos sulfatos (74,0%) e com fucose (Fuc) (93,3%) presentes na amostra hipofisária e a tendência da preparação recombinante de apresentar glicanos com maior peso molecular e com uma menor variação nas isoformas.
Expression, purification, and characterization of authentic mouse prolactin obtained in Escherichia coli periplasmic space
2012 - SUZUKI, MIRIAM F.; ARTHUSO, FERNANDA S.; OLIVEIRA, JOAO E.; OLIVEIRA, NELIO A.J.; GOULART, HERBERT R.; CAPONE, MARCOS V.N.; RIBELA, MARIA T.C.P.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
Enhancement of human prolactin synthesis by sodium butyrate addition to serum-free CHO cell culture
2010 - GOULART, HERBERT R.; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; CAPONE, MARCOS V.N.; OLIVEIRA, TAIS L. de; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.