AMANDA IKEGAMI
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Dissertação IPEN-doc 25674 Avaliação in vitro e in vivo do impacto do silenciamento do gene NF-kB1 no ciclo celular, capacidade proliferativa e na radiossensibilidade do adenocarcinoma renal2019 - IKEGAMI, AMANDAO carcinoma de células renais (CCR) é responsável por, aproximadamente, 1 a 3% das neoplasias malignas humanas e, dentre os tumores urológicos, é o mais agressivo. A heterogeneidade biológica, a resistência aos fármacos e os efeitos colaterais à quimioterapia são os maiores obstáculos ao tratamento eficaz do CCR. Várias moléculas vêm sendo correlacionadas com o fenótipo agressivo deste tumor, sendo uma delas o fator de transcrição NF-kB. Estudos demonstraram a ativação de NF-kB no CCR e muitos apontaram NF-kB1 (p50) como uma molécula importante na progressão tumoral e metástase. Neste trabalho, foi utilizada a técnica de silenciamento gênico de interferência por RNA - Short hairpin RNA (shRNA) - para diminuir a expressão de NF-kB1 em células murinas de carcinoma de células renais (Renca). Verificou-se que, in vitro, a diminuição da expressão do gene NF-kB1 reduz a capacidade proliferativa das células Renca e aumenta a taxa de apoptose tardia/necrose e a quantidade de células na fase G2/M do ciclo celular. Além disso, as análises de Western blot revelaram aumento significativo da expressão proteica de Ciclina B1 e Bax. A regulação negativa da p50 também alterou a capacidade clonogênica das células que, conjugada à irradiação ionizante, levou à diminuição significativa da fração de sobrevivência das células Renca e diminuiu a viabilidade celular verificada através do ensaio de MTS. Os ensaios in vivo mostraram que as células com baixa expressão de NF-kB1 (Renca-shRNA- NF-kB1) apresentam tumorigenicidade significativamente menor que as células controle e as análises de imunohistoquímica mostraram aumento significativo das áres necróticas dos tumores Renca-shRNA-NF-kB1, além da diminuição da marcação de Ki-67, um marcador de proliferação celular. Os resultados indicam que a diminuição da expressão de NF-kB1 pode suprimir a tumorigênese do CCR, induzindo apoptose tardia/necrose, podendo ser um potencial alvo terapêutico para este carcinoma.Artigo IPEN-doc 24344 Knockdown of NF-κB1 by shRNA inhibits the growth of renal cell carcinoma in vitro and in vivo2018 - IKEGAMI, AMANDA; TEIXEIRA, LUIZ F.S.; BRAGA, MARINA S.; DIAS, MATHEUS H. dos S.; LOPES, EDUARDO C.; BELLINI, MARIA H.Renal cell carcinoma (RCC) accounts for approximately 2-3% of human malignancies and is the most aggressive among urologic tumors. Biological heterogeneity, drug resistance and chemotherapy side effects are the biggest obstacles to the effective treatment of RCC. The NF-кB transcription factor is one of several molecules identified to be responsible for the aggressive phenotype of this tumor. In the past decade, several studies have demonstrated the activation of NF-kB in RCC, and many implicated NF- κB1 (p50) as an important molecule in tumor progression and metastasis. In the present study, a lentivirus was used to deliver shRNA targeting NF-κB1 into mouse renal cell carcinoma (Renca) cells. It was determined that the knockdown of the NF-κB1 gene led to a reduction in cell proliferation and late apoptosis/necrosis in vitro. Flow cytometry analysis demonstrated G2/M arrest in the cells. In addition, immunoblotting analysis revealed a significant increase in cyclin B1 and Bax. In vivo experiments showed that Renca-shRNA-NF-кB1 cells have significantly diminished tumorigenicity. Moreover, immunohistochemical analysis revealed an increase in necrotic areas of Renca-shRNANF- кB1 tumors. Thus, this study indicates that downregulation of NF-кB1 can suppress RCC tumorigenesis by inducing late apoptosis/necrosis. Therefore, NF-кB1 may be a potential therapeutic target for RCC.