Caracterização da estrutura oligossacarídica de prolactina glicosilada humana (G-hPRL) nativa e recombinante

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dc.contributor.advisorCarlos Roberto Jorge Soarespt_BR
dc.contributor.authorCAPONE, MARCOS V.N.pt_BR
dc.coverageNacionalpt_BR
dc.date.accessioned2014-10-09T12:36:04Zpt_BR
dc.date.accessioned2014-10-09T13:59:22Z
dc.date.available2014-10-09T12:36:04Zpt_BR
dc.date.available2014-10-09T13:59:22Z
dc.date.issued2013pt_BR
dc.description.abstractA prolactina humana (hPRL) é um hormônio polipeptídico secretado pela hipófise anterior sob regulação do hipotálamo, envolvido em uma variedade de processos biológicos como o desenvolvimento da glândula mamária e lactação. O produto recombinante é importante no diagnóstico médico e no tratamento de insuficiência da lactação. Este hormônio pode ocorrer sob a forma de proteína não glicosilada (NG-hPRL) e glicosilada (G-hPRL), com pesos moleculares de aproximadamente 23 e 25 kilodalton (kDa), respectivamente; possui um único sítio de N-glicosilação localizado na asparagina (Asn) posição 31, que é parcialmente ocupado, representando assim um modelo particularmente interessante de glicosilação. A atividade biológica da G-hPRL é muito menor comparada à NG-hPRL (~4 vezes) e sua função fisiológica ainda não é bem definida: a porção de carboidrato parece ter um importante papel na biossíntese, secreção, atividade biológica, e sobrevivência plasmática do hormônio. O objetivo principal desse trabalho foi comparar as estruturas dos N-glicanos presentes na prolactina glicosilada hipofisária (G-hPRL-NHPP) com a recombinante. Para obter a G-hPRL recombinante foi realizada uma produção em escala laboratorial a partir de células de ovário de hamster chinês (CHO) geneticamente modificadas e adaptadas ao crescimento em suspensão. Foi adicionada, ao meio de cultura cicloheximida (CHX), cujo efeito principal foi aumentar a relação G-hPRL/NGhPRL que passou de 5% para 38%, facilitando assim a purificação da G-hPRL. A G-hPRL foi purificada em duas etapas, uma troca catiônica seguida de purificação por cromatografia liquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC) que se demonstrou eficiente na separação das duas isoformas de hPRL. A G-hPRL recombinante IPEN foi assim analisada por diversas técnicas confirmando a sua pureza e atividade biológica, incluindo comparações com outras amostras de referências de origem hipofisária adquirida junto ao National Hormone & Peptide Program (NHPP-E.U.A.) . Foi realizada também a determinação inédita de Nglicanos presentes na G-hPRL produzida por células CHO e na G-hPRL nativa, produzida pela hipófise humana, possibilitando comparar as duas estruturas de carboidratos e alcançando assim uma das principais metas desse projeto. Entre as principais diferenças encontradas nas estruturas dos dois N-glicanos, destacam-se a baixa quantidade de ácido siálico (NeuAc), a alta porcentagem de glicanos sulfatos (74,0%) e com fucose (Fuc) (93,3%) presentes na amostra hipofisária e a tendência da preparação recombinante de apresentar glicanos com maior peso molecular e com uma menor variação nas isoformas.pt_BR
dc.description.notasgeraisDissertação (Mestrado)pt_BR
dc.description.notasteseIPEN/Dpt_BR
dc.description.teseinstituicaoInstituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SPpt_BR
dc.format.extent81pt_BR
dc.identifier.citationCAPONE, MARCOS V.N. <b>Caracterização da estrutura oligossacarídica de prolactina glicosilada humana (G-hPRL) nativa e recombinante</b>. Orientador: Carlos Roberto Jorge Soares. 2013. 81 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: <a href="https://dx.doi.org/10.11606/D.85.2013.tde-04072013-161538">10.11606/D.85.2013.tde-04072013-161538</a>. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10212.
dc.identifier.doi10.11606/D.85.2013.tde-04072013-161538
dc.identifier.urihttp://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10212pt_BR
dc.localSão Paulopt_BR
dc.rightsopenAccesspt_BR
dc.subjectlthpt_BR
dc.subjecthormonespt_BR
dc.subjectmammary glandspt_BR
dc.subjectlactationpt_BR
dc.subjectrecombinant dnapt_BR
dc.subjectoligosaccharidespt_BR
dc.subjectpituitary hormonespt_BR
dc.subjectcho cellspt_BR
dc.subjecthigh-performance liquid chromatographypt_BR
dc.titleCaracterização da estrutura oligossacarídica de prolactina glicosilada humana (G-hPRL) nativa e recombinantept_BR
dc.title.alternativeCharacterization of the oligosaccharide structure of human glycosylated prolactin (G-hPRL) native and recombinantpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
dspace.entity.typePublication
ipen.autorMARCOS VINICIUS NUCCI CAPONE
ipen.codigoautor8201
ipen.contributor.ipenauthorMARCOS VINICIUS NUCCI CAPONE
ipen.date.recebimento13-07pt_BR
ipen.identifier.ipendoc19030pt_BR
ipen.identifier.localizacaoT577.17 / C246cpt_BR
ipen.meioeletronicohttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-04072013-161538/pt-br.phppt_BR
ipen.type.genreDissertação
relation.isAuthorOfPublication87cb5da5-02bb-4fc1-9984-094cc8058958
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sigepi.autor.atividadeCAPONE, MARCOS V.N.:8201:810:Spt_BR
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