Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131
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Data
2023
Data de publicação:
Autores IPEN
Orientador
Carlos Roberto Jorge Soares
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Resumo
A prolactina humana é uma proteína hormonal de 23 kDa produzida principalmente pela glândula pituitária, e desempenha várias funções biológicas, como por exemplo: regulação do sistema imunológico, hematopoiese e indução da lactação. No entanto, alterações em seu nível sérico estão diretamente associadas ao desenvolvimento de tumores de mama, próstata e ovário. O objetivo desse estudo foi a produção de hPRL recombinante, contendo 6 histidinas residuais e uma metionina na região N-terminal, que pudesse ser marcada com o radioisótopo I131 para uso como uma ferramenta diagnóstica de cânceres relacionados a prolactina. Neste estudo, a hPRLhis foi produzida no citoplasma de bactérias E. coli e os corpos de inclusão gerados foram solubilizados sob alta pressão hidrostática. Foi utilizado o plasmídeo pET28a(+) com o cDNA da prolactina humana na cepa BL21(DE3). Os corpos de inclusão foram isolados e lavados. Diversas condições de solubilização foram testadas, incluindo diferentes níveis de pH e agentes redutores. A proteína foi caracterizada e sua atividade biológica foi avaliada usando células BaF/3-LLP. A radiomarcação com 131I seguiu o método de marcação direta. A prolactina humana (hPRL) foi renaturada com sucesso em condições de alta pressão (2,4 kBar) e pH 10 com incubação por 16 horas em GSSH e GSH. Cerca de 3 mg de prolactina foram obtidos a partir deste processo em um volume total de 5 mL de meio dialisado. A radiomarcação da proteína atingiu um rendimento de até 75% com 100 μCi de Iodo e 10 μg de CLT. Este estudo estabeleceu as condições para produzir hPRLhis no citoplasma bacteriano usando renaturação de alta pressão. A hPRLhis demonstrou alto nível de expressão, pureza e atividade biológica, confirmada em ensaios com células. Além disso, foi radiomarcada para futuras pesquisas com receptores em células tumorais.
Como referenciar
POMIN, STEPHANIE A. Síntese de prolactina humana em citoplasma de E.coli com renaturação por alta pressão hidrostática para radiomarcação com I-131. Orientador: Carlos Roberto Jorge Soares. 2023. 79 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) - Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. Disponível em: https://repositorio.ipen.br/handle/123456789/48004. Acesso em: 27 Apr 2024.
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