Obtenção de um modelo homólogo de terapia gênica mediante administração direta de um plasmídeo com o gene do hormônio de crescimento murino em camundongos anões imunocompetentes

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dc.contributor.advisorCibele Nunes Peronipt_BR
dc.contributor.authorCECCHI, CLAUDIA R.pt_BR
dc.coverageNacionalpt_BR
dc.date.accessioned2014-10-09T12:35:39Zpt_BR
dc.date.accessioned2014-10-09T14:03:56Z
dc.date.available2014-10-09T12:35:39Zpt_BR
dc.date.available2014-10-09T14:03:56Z
dc.date.issued2013pt_BR
dc.description.abstractNíveis sustentáveis de hormônio de crescimento humano (hGH) circulante e aumento de peso altamente significativo, avaliados também em comparação a repetidas injeções de hormônio, foram observados em trabalhos anteriores, baseados na eletrotransferência de DNA plasmidial no músculo de camundongos anões imunodeficientes (lit/scid). No presente trabalho, um modelo animal homólogo de terapia gênica para GH foi estudado mediante clonagem da sequência genômica do DNA de GH de camundongo (mGH-gDNA), a qual substituiu o hGH-gDNA no vetor que havia sido utilizado em camundongos anões imunodeficientes. O novo vetor, agora nomeado UBI-mGH-gDNA, foi utilizado em camundongos anões imunocompetentes (lit/lit). Foi primeiramente realizado um teste in vitro, transfectando-se células humanas HEK 293 com este plasmídeo e obtendo-se uma expressão de 3,0 &mu;g mGH/106 células/dia, contra 3,7 &mu;g mGH/106 células/dia, para o UBI-hGH-gDNA. Estes dois plasmídeos foram então injetados (50 &mu;g/animal) no músculo quadríceps de camundongos, seguido de eletroporação, realizando um ensaio de 94 dias. Enquanto após 15 dias, as inclinações das curvas de variação de peso relacionadas ao mGH, hGH e salina foram 0,130, 0,112 e 0,027 g/camundongo/dia, respectivamente, após 94 dias, as inclinações correspondentes foram 0,041, 0,028 e 0,033 g/camundongo/dia. As análises estatísticas mostraram que após 15 dias, as inclinações das duas curvas com o GH foram significativamente maiores que a inclinação do controle (P<0,001), enquanto que após 94 dias, somente a inclinação da curva do mGH foi maior que a do controle (P<0,005). A porcentagem de aumento de peso nos animais tratados com o gene do mGH, após 94 dias, foi de 34,3%, enquanto que o comprimento nariz-cauda e o comprimento do fêmur, dois parâmetros que medem diretamente o crescimento longitudinal, foram de 9,5% e 26%, respectivamente, quando comparados aos valores iniciais. A interrupção do crescimento progressivo do grupo tratado com hGH não foi inesperada, considerando a óbvia reação imunogênica dos animais imunocompetentes contra o GH humano e não contra o de camundongo (título do anticorpo anti-hGH 1:100 a 1:3200). A inclinação altamente positiva do grupo controle, já observada em camundongos lit/lit mas não em lit/scid, é provavelmente devida ao ganho de peso natural desta linhagem, não suportada, contudo, por um proporcional crescimento longitudinal. Níveis circulatórios de mGH da ordem de 4 ng/mL foram detectados após 15 dias para o grupo tratado com o mGH, enquanto o grupo controle apresentou níveis em torno de 0,7 ng mGH/mL (P<0,001). Níveis circulatórios de mIGF-I foram também determinados nos dias 15, 45 e 94 nos animais tratados com mGH, sempre mostrando valores 1,5 - 3,0 vezes maiores que o grupo controle, e valores 1,2-1,6 vezes maiores que o grupo tratado com hGH. Este modelo de tratamento homólogo pode ser considerado uma primeira abordagem e um importante suporte para futuros ensaios pré-clínicos baseados na administração de DNA plasmidial para o tratamento da deficiência de GH humano.pt_BR
dc.description.notasgeraisTese (Doutoramento)pt_BR
dc.description.notasteseIPEN/Tpt_BR
dc.description.teseinstituicaoInstituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SPpt_BR
dc.format.extent67pt_BR
dc.identifier.citationCECCHI, CLAUDIA R. <b>Obtenção de um modelo homólogo de terapia gênica mediante administração direta de um plasmídeo com o gene do hormônio de crescimento murino em camundongos anões imunocompetentes</b>. Orientador: Cibele Nunes Peroni. 2013. 67 f. Tese (Doutoramento) - Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP, São Paulo. DOI: <a href="https://dx.doi.org/10.11606/T.85.2013.tde-15042013-094237">10.11606/T.85.2013.tde-15042013-094237</a>. Disponível em: http://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10178.
dc.identifier.doi10.11606/T.85.2013.tde-15042013-094237
dc.identifier.urihttp://repositorio.ipen.br/handle/123456789/10178pt_BR
dc.localSão Paulopt_BR
dc.rightsopenAccesspt_BR
dc.subjectgene therapypt_BR
dc.subjectplasmidspt_BR
dc.subjectdna-cloningpt_BR
dc.subjectmicept_BR
dc.subjectsthpt_BR
dc.subjectintramuscular injectionpt_BR
dc.subjectimmunitypt_BR
dc.titleObtenção de um modelo homólogo de terapia gênica mediante administração direta de um plasmídeo com o gene do hormônio de crescimento murino em camundongos anões imunocompetentespt_BR
dc.title.alternativeAn homologous model of gene therapy by in vivo administration of a plasmid containing the mouse growth hormone gene in immunocompetent dwarf micept_BR
dc.typeTesept_BR
dspace.entity.typePublication
ipen.autorCLAUDIA REGINA CECCHI
ipen.codigoautor3865
ipen.contributor.ipenauthorCLAUDIA REGINA CECCHI
ipen.date.recebimento13-04pt_BR
ipen.identifier.ipendoc18896pt_BR
ipen.identifier.localizacaoT575.113 / C387opt_BR
ipen.meioeletronicohttp://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-15042013-094237/pt-br.phppt_BR
ipen.type.genreTese
relation.isAuthorOfPublication9fc2c340-60ea-4b6f-bdbc-2a2d4156f404
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sigepi.autor.atividadeCECCHI, CLAUDIA R.:3865:810:Spt_BR
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