EVELIN CAROLINE DA SILVA

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    Dissertação IPEN-doc 25954
    Análise do perfil de expressão proteica da linhagem celular humana de adenocarcinoma renal, 786-O, submetida à radiação ionizante
    2018 - SILVA, EVELIN C.da
    O carcinoma de células renais (CCR) representa 3% das neoplasias humanas e aproximadamente 90% das neoplasias renais e entre os tumores urológicos. O CCR é bastante resistente à radioterapia convencional. Entretanto, com o aparecimento de novas técnicas/equipamentos é possivel a aplicação de doses com precisão presevando-se os tecidos adjacentes. Para a verificação da expressão proteica em diferentes tecidos e fluidos corporais, foi utilizado o estudo proteômico sob diferentes condições e / ou tempos. A espectrometria de massa permite a identificação e quantificação de milhares de proteínas e peptídeos em fluidos biológicos ou células lisadas, sendo assim uma ferramenta poderosa para identificação de potenciais biomarcadores de doenças. A finalidade deste trabalho foi analisar o perfil proteico das células de adenocarcinoma renal (786-0) após a radiação com doses que variaram de 2 a 10 Gy. Os dados foram tratados com o programa One-way ANOVA seguida do de Bonferroni. Pelo ensaio de clonogenicidade definiou-se a dose de 8 Gy como a ideal estudos. A extração das proteínas citoplasmáticas foi realizada com o kit de extração do proteoma subcelular PE e a quantificação das proteínas feita pelo método de Lowry. A integridade das proteínas foi analisada por SDS-PAGE e a solução proteica foi verificada em LTQ Orbitrap. Os resultados gerados foram analisados pelo servidor MASCOT para a busca de peptídeos. A análise por espectrometria de massa foi possível identificar 44 proteínas nas amostras não irradiadas - e 87 das amostras irradiadas. Nas amostras não irradiadas a distribuição dos grupos funcionais foi de síntese proteica 46,66%; Metabolismo energético 16,66%; Migração e proliferação 16,66%; Antioxidantes 3,33%. No grupo irradiado síntese proteica 35,89%; Metabolismo energético 20,51%; Migração e proliferação 20,51%; Antioxidantes 5,12%; Chaperonas moleculares 5,12% e Endopeptidases 5,12%. Em seguida, analisou-se o espetro de as sequências com escores acima de 40. Nas amostras irradiadas encontrou-se: ENO1 (47 kDa); A VIM (53 kDa)/ HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cofilina-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1/ HSP27. Deste grupo, entendemos que a subunidade alfa do proteassoma - tipo 1 (PSMA1), que possui uma atividade molecular de endopeptidase, seja um alvo interessante para estudos posteriores.
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    Artigo IPEN-doc 21265
    Expression of genes involved in porphyrin biosynthesis pathway in the human renal cell carcinoma
    2015 - ROCHA FILHO, HUGO N. da; SILVA, EVELIN C. da; SILVA, FLAVIA R.O.; COURROL, LILIA C.; MESQUITA, CARLOS H. de; BELLINI, MARIA H.
    Renal cell carcinoma (RCC) remains one of the greatest challenges of urological oncology and is the third leading cause of death in genitourinary cancers. Surgery may be curative when patients present with localized disease. Our previous results demonstrated the autofluorescence of blood PpIX in primary RCC mouse model and an increase in fluorescence intensity as a function of growth of the subcutaneous tumor mass. In another work, a nice correlation between the growth of the tumor mass and tissue fluorescence intensity was found. The aim of this study was to evaluate the expression profile of porphyrin biosynthesis pathway-related genes of human kidney cells. We used two kidney cell lines, one normal (HK2) and another malignant (Caki-1). Endogenous and 5-aminolevolinic acid (ALA) induced protoporphyrin IX (PpIX) HK2 and Caki-1 cells were analyzed by fluorescence spectroscopy. Real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) was used to measure mRNA of those genes. Emission spectra were obtained by exciting the samples at 405 nm. For ALA untreated cells the maximum fluorescence intensity was detected at 635 nm. The mean peak area of emission spectra in both cells types increased linearly in function of cell number. Besides, basal levels of PpIX autofluorescence of each cell concentration of HK2 samples were significantly lower than those of Caki-1 samples. For ALA-treated cells the mean PpIX spectra shows PpIX emission peak at 635 nm with a shoulder at 700 nm. Analysis of PpIX fluorescence intensity ratio between tumor cells and HK2 cells showed that fluorescence intensity was, on average, 26 times greater in tumor cells than in healthy cells. qRT-PCR revealed that in Caki-1 ALA-treated cells, PEPT gene was significantly up-regulated and FECH and HO-1 genes were significantly down regulated in comparison with HK2 ALAtreated cells. In conclusion, our results demonstrate the preferential accumulation of ALA-induced PpIX in human RCC and also indicate that PEPT1, FECH and HO-1 genes are major contributors to this accumulation.