DEBORA PICANÇO AURELIANO

DEBORA PICANÇO AURELIANO

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Cell death mechanisms in Leishmania amazonensis triggered by methylene blue-mediated antiparasitic photodynamic therapy
2018 - AURELIANO, DEBORA P.; LINDOSO, JOSE A.L.; SOARES, SANDRA R. de C.; TAKAKURA, CLEUSA F.H.; PEREIRA, THIAGO M.; RIBEIRO, MARTHA S.
Antiparasitic photodynamic therapy (ApPDT) is an emerging approach to manage cutaneous leishmaniasis (CL) since no side effects, contraindications and parasite resistance have been reported. In addition, methylene blue (MB) is a suitable photosensitizer to mediate ApPDT on CL. In this study we aimed to look for the best parameters to eradicate Leishmania amazonensis and investigated the cell death pathways involved in MB-mediated ApPDT. MB uptake by parasites was determined using different MB concentrations (50, 100, 250 and 500 μM) and incubation times (10, 30 and 60 min). L. amazonensis promastigotes were cultured and submitted to ApPDT using different concentrations of MB (50, 100 and 250 μM) combined to a red LED emitting at 645 ± 10 nm. The pre-irradiation time was 10 min. Two optical powers (100 mW and 250 mW) were tested and cells were exposed to 60 and 300 s of MB-mediated ApPDT delivering energies of 6, 15, 30 and 75 J and fluences of 21.2, 53.1, 106.2 and 265.4 J/cm2, respectively. Following ApPDT, cells were prepared for flow cytometry and transmission electron microscopy to unravel the mechanisms of cell death. Our results showed the lowest MB concentration (50 μM) and the lowest optical power (100 mW) promoted the highest percentage of cell decrease. ApPDT caused alterations on cell membrane permeability as well depolarization of mitochondrial membrane potential. We also observed ultrastructural changes of the parasites such as cell shrinkage, intense vacuolization of the cytoplasm, enlargement of mitochondrion-kinetoplast complex, and small blebs on parasite flagella and cell membrane after MB-mediated ApPDT. Taken together, our findings ratify that ApPDT parameters play a pivotal role in cell susceptibility and suggest that apoptosis is involved in parasite death regardless MB-mediated ApPDT protocol.
Efeito fotodinâmico mediado por azul de metileno na inativação de Leishmania (L.) amazonensis: estudo in vitro
2015 - AURELIANO, DEBORA P.
A terapia fotodinâmica (PDT) é uma modalidade terapêutica utilizada para causar morte celular baseada no uso de fármacos fotossensibilizadores e aplicação de luz com comprimento de onda adequado. No processo fotodinâmico, a molécula do fotossensibilizador (FS) é excitada para o seu estado singleto como resultado da absorção da luz gerando estresse oxidativo em diversas estruturas celulares, dentre elas a mitocôndria. A geração do estresse oxidativo pode induzir a resposta de morte por via apoptótica. Esse estudo tem como objetivo avaliar o tipo de resposta de morte celular em formas promastigotas metacíclicas de Leishmania (L.) amazonensis submetidas à PDT utilizando o azul de metileno como FS. Para isso algumas condições como captação do FS pela célula, potência de irradiação (100 mW/ 250m W), concentração do FS (50, 100, 250 e 500 μM) e tempo de irradiação (60 s /300 s) foram testadas para compreender a resposta do parasito a esse desafio leishmanicida. Após essas etapas foi investigada a viabilidade das promastigotas por meio da atividade mitocondrial utilizando o MTT ((brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium). Em seguida, a exposição de fosfatidilserina, a permeabilidade de membrana e a alteração de potencial de membrana da mitocôndria foram avaliados para analisar a via de resposta de morte celular provocada pela ação fotodinâmica e as possíveis mudanças morfológicas e ultraestruturais que esse parasito pudesse apresentar. Os resultados obtidos pelos testes \"in vitro\" de viabilidade celular (MTT) das promastigotas demostra que a terapia consegue diminuir a atividade metabólica em até 80%, na condição de 50 μM - 100 mW/300s. Foi possível concluir que promastigotas de L.(L.) amazonensis sofrem dano celular provocado pelo estresse oxidativo. A morte celular desse parasito é possivelmente por via apoptótica. A análise por microscopia eletrônica de transmissão indica danos celulares como encolhimento celular, arredondamento, vacuolização do meio intracelular, perda de integridade do flagelo e migração da cromatina nuclear para a periferia da membrana do núcleo do parasito.
Inactivación fotodinámica de promastigotas de Leishmania amazonensis por acción de Soranjidiol
2016 - DIMMER, JESICA; AURELIANO, DEBORA P.; CABRERA, JOSE L.; MONTOYA, SUSANA N.; RIBEIRO, MARTHA S.
Leishmaniosis cutánea (CL) es una enfermedad parasitaria desatendida, común en las zonas tropicales y subtropicales del mundo, y se caracteriza por lesiones únicas o múltiples en la piel que pueden ser ulcerosas o no y limitadas a una zona específica.1,2 Las drogas empleadas en el tratamiento de esta enfermedad presentan numerosas desventajas3 y la terapia fotodinámica (TFD) surge como un posible tratamiento para esta dolencia. Soranjidiol (Sor) es un derivado antraquinónico aislado del género Heterophyllaea que ha demostrado poseer propiedades fotosensibilizantes4 y en la actualidad, está siendo estudiado como potencial agente anticancerígeno y antimicrobiano in vitro, cuyos promisorios resultados apoyarían su aplicación en TFD. 5-8 En este trabajo, se propuso evaluar el efecto fotodinámico in vitro de Soranjidiol sobre promastigotas de Leishmania amazonensis (L.a.). El ensayo se realizó con L.a. en su forma promastigota metacíclica. Se empleó SOR (40 "M) como FS, y se irradió cada pocillo en forma independiente con LED azul (!máx. emisión= 410 ± 10 nm, intensidad=50 mW/cm2). Luego de la fotoestimulación, se evaluó la actividad mitocondrial de los parásitos, empleando la técnica colorimétrica del MTT.9 Se incluyeron los siguientes controles: control negativo (L.a. sin tratamiento, CN), control positivo (L.a. tratado con dodecilsulfato sódico (SDS), tensioactivo que incrementa la permeabilidad de la membrana, CP), control Sor (L.a. con tratamiento de FS en oscuridad, CSor) y control LED (L.a. tratado con LED durante 7,5 min, CLED). Los resultados muestran que no se observaron diferencias significativas entre CN (100,00 ± 3,15) %, CSor (107,40 ± 7,07) % y CLED (91,49 ± 5,96) %; por lo cual, podemos afirmar que el FS no presenta toxicidad en oscuridad y que la irradiación de L.a. con LED durante 7,5 min no produce una reducción significativa de la actividad mitocondrial. El tratamiento de L.a. con LED azul y Sor, produjo una reducción de la actividad mitocondrial proporcional al tiempo de exposición: LED 3 min (95,70 ± 9,07) %; LED 4,5 min (45,30 ± 7,80) %; LED 6 min (28,32 ± 1,83) %, hasta alcanzar una actividad mitocondrial del (24,28 ± 2,68) % a los 7,5 min de irradiación, porcentaje aún menor que el CP (30,45 ± 2,65) %. Estos resultados muestran que la utilización de Soranjidiol potencia el efecto del LED azul sobre L. amazonenesis, ya que logró una reducción del parasito del 75% con un tiempo de exposición de 7,5 min.
Treatment and control of Leihmaniasis using photodynamic therapy
2015 - AURELIANO, DEBORA P.; RIBEIRO, MARTHA S.; LINDOSO, JOSE A.L.; POGLIANI, FABIO C.; SELLERA, FABIO P.; SONG, DENNIS; BAPTISTA, MAURICIO S.
Cell death of Leishmania amazonensis promastigotes induced by photodynamic therapy
2015 - AURELIANO, DEBORA P.; LINDOSO, JOSE A.L.; SOARES, SANDRA R.C.; RIBEIRO, MARTHA S.
Cell death of Leishmania amazonensis promastigotes induced by photodynamic therapy
2015 - AURELIANO, DEBORA P.; LINDOSO, JOSE A.L.; SOARES, SANDRA R.C.; RIBEIRO, MARTHA S.
Antiparasitic activity of photodynamic therapy in Leishmania amazonensis promastigotes
2014 - AURELIANO, DEBORA P.; LINDOSO, JOSE A.L.; RIBEIRO, MARTHA S.
Uptake of methyene blue photosensitizer in Lewishmania amazonensis
2013 - AURELIANO, DEBORA; LINDOSO, JOSE A.; NUNEZ, SILVIA; RIBEIRO, MARTHA