GABRIELA ORTEGA COELHO THOMAZI

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Paratrygon aiereba irradiated anti-mucus serum reduce edematogenic activity induced in experimental model
2020 - THOMAZI, GABRIELA O.C.; COSTA, ANDREA da; RODRIGUES, JAQUELINE P.; ALVES, GLAUCIE J.; PREZOTTO NETO, JOSE P.; TURIBIO, THOMPSON de O.; ROCHA, ANDRE M.; AIRES, RAQUEL da S.; SEIBERT, CARLA S.; SPENCER, PATRICK J.; GALISTEO JUNIOR, ANDRES J.; ANDRADE JUNIOR, HEITOR F. de; NASCIMENTO, NANCI do
Accidents by freshwater stingrays are common in northern Brazil, there is no specific therapy for high morbidity and local tissue destruction. The irradiation of venoms and toxins by ionizing radiation has been used to produce appropriate immunogens for the production of antisera. We planned to study the efficacy of stinging mucus irradiation in the production of antisera, with serum neutralization assays of edematogenic activity and quantification of cytokines performed in animal models of immunization with native and irradiated mucus of Paratrygon aiereba, a large freshwater stingray. Antiserum potency and its cross-reactivity with mucus from other freshwater stingrays were detected by ELISA. Immunization models demonstrated the ability to stimulate a strong humoral response with elevated levels of serum IgG detectable by ELISA, and both native and irradiated mucus were immunogenic and capable of recognizing mucus proteins from other freshwater neotropical stingrays. Mucus P. aiereba causes cellular and humoral adaptive immune responses in cells of immunized mice producing antibodies and cytokines such as TNF-α, IL-6 and IL-17. Rabbit antisera immunized with mucus from P. aiereba irradiated at 2 kGy showed a significant reduction of mucus-induced edematogenic activity in mice. Our data suggest that the use of antisera against freshwater stingray mucus show the possibility of specific therapy for these accidents.
Redução da atividade edematogênica promovida pelo muco da raia de água doce Paratrygon aiereba utilizando soro produzido contra o muco irradiado com raios gama de 60Co
2016 - THOMAZI, G.O.C.; PREZOTTO NETO, J.P.; ALVES, G.J.; TURIBIO, T.O.; AIRES, R.S.; ROCHA, A.M.; SEIBERT, C.S.; SPENCER, P.J.; NASCIMENTO, N.
Introdução: As raias são peixes peçonhentos com ampla distribuição geográfica nos principais rios brasileiros e merecem destaque por estarem frequentemente associadas a acidentes em seres humanos. Estes agravos são frequentes na região Norte do país e favorecidos pelo hábito desses peixes de permanecerem em repouso no fundo arenoso ou lamacento de águas rasas e pela frequente utilização humana dos rios, seja por lazer ou atividades ocupacionais. Os ferimentos provocados pelos ferrões das raias são dolorosos, de difícil cicatrização, causam necroses extensas e fenômenos sistêmicos. O muco que recobre toda a extensão do corpo desses peixes pode aumentar a gravidade desses ferimentos. A escassez de estudos voltados para o tratamento específico das lesões oriundas dos agravos por esses peixes, a ausência de estudos com outros gêneros de raias dulcícolas e a possibilidade de produção de soro contra o veneno de raias estimularam o desenvolvimento deste estudo utilizando a radiação ionizante que tem se mostrado vantajosa na atenuação de toxinas animais, resultando na obtenção de melhores imunógenos para a produção de soros. Objetivo: Avaliar e comparar o potencial neutralizante dos soros anti-mucoda raia Paratrygonaierebanativo ou irradiado (2 kGy-60Co) contra a ação edematogênicado muco nativo. Método: Mediante aprovação da CEUA/IPEN/SP n°126/2013 e do ICMBion.º 45407-1/2014 foi desenvolvido este trabalho. O muco (50μg/mL) de P. aierebafoi incubado em banho-maria com os soros anti-muconativo ou soro anti-mucoirradiado diluídos de 1:100 ou 1:1.000 (soros de coelhos imunizados contra o muco nativo ou irradiado por 60Co de P. aiereba). Após a incubação, as amostras foram injetadas (30μL) no coxim plantar da pata posterior de camundongos Swissmachos, 18 a 20g, (n=30). A interferência na atividade edematogênicafoi verificada nos tempos de 1h, 2h, 4h e 24h após a inoculação. Em todos os animais foi verificado o volume inicial individual de cada pata antes da injeção das amostras. Os volumes foram mensurados em pletismômetroe os resultados expressos como a variação do volume em relação ao volume basal em μL por período (ExpBioMed. 239:601, 2014). A avaliação estatística foi realizada pela análise de variância com auxílio do softwareGraphPadPrism5.0. Resultados: O muco de P. aierebafoi capaz de induzir edema de 1h a 4h após a inoculação, com declínio de 4 a 24h (p<0,01 em relação aos controles). O soro anti-muconativo não foi capaz de inibir a formação do edema nas diluições testadas, sem diferença estatística com o edema induzido pelo muco (p>0,05). O soro anti-mucoirradiado diluído 1:100 apresentou interferência significativa na atividade edematogênicanas primeiras quatro horas (p<0,01). O soro anti-mucoirradiado 1:1000 foi capaz de diminuir a formação de edema nas 1ª e 4ª horas (p<0,01). O edema foi reduzido pelo soro anti-mucoirradiado pré-incubado com o muco não irradiado (nativo). Conclusão: Esse resultado mostra que além do muco irradiado ser capaz de estimular a proliferação de células de memória, ou seja, a produção de anticorpos IgGespecíficos, estas imunoglobulinas são capazes de reconhecer a fração responsável pela atividade edematogênica. Estes resultados nos permite concluir que o processo de irradiação tornou o muco da raia P. aierebamais antigênico.
Previous 60-CO radiation from Paratrygon aiereba mucus induces the production of highly responsive antibodies and a better immune response in mice
2017 - THOMAZI, GABRIELA O.C.; COSTA, ANDREA da; RODRIGUES, JAQUELINE P.; ALVES, GLAUCIE J.; TURIBIO, THOMPSON de O.; ROCHA, ANDRE M.; AIRES, RAQUEL da S.; JACOME, LARISSA B.S.; SEIBERT, CARLA S.; SPENCER, PATRICK J.; GALISTEO JUNIOR, ANDRES J.; ANDRADE JUNIOR, HEITOR F. de
Wounds from stinging freshwater stingrays are painful, difficult to heal and cause extensive necrosis and systemic phenomena. The treatment is symptomatic, of low efficiency and there is no therapy, which causes more suffering to the injured. This study aimed to evaluate the immune response induced by the native or irradiated by 60-Co gamma from Paratrygon aiereba mucus. IPEN’s Committee on Ethics in the Use of Animals (n.º126/2013) and lanes captured under license from the Chico Mendes Institute for Biodiversity Conservation (n.º6781-1/2014) approved this research. For the assays, sera from Swiss mice previously immunized against native or irradiated mucus were used. The proliferation of splenic B cells in response to mucus was evaluated by the In Vitro Induced Antibody Production method and serum and splenic cytokines were also quantified. Our data demonstrate that the irradiated mucus of P. aiereba induces greater production of antibodies and more immunological memory in the mice. Spleen cells from animals immunized against irradiated mucus produced IFN-γ, TNF-α and IL-10, and serum TNF-α (immunized group against irradiated mucus) and IL-6 and IL-17 (immunized group against native mucus). The results corroborate the use of ionizing radiation, with production of highly responsive antibodies and better immune response, besides proving that Paratrygon aiereba mucus is capable of stimulating cellular and humoral adaptive immune response, contributing to the continuity of associated investigations.
Resposta imunológica em modelos animais imunizados contra o muco nativo ou irradiado por raios gama de 60 Co da raia de água doce Paratrygon aiereba
2016 - THOMAZI, GABRIELA O.C.
As raias são peixes peçonhentos e estão frequentemente associadas a acidentes em seres humanos, principalmente na região Norte do Brasil, favorecidos pelo hábito desses peixes de permanecerem no fundo de águas rasas e pela contínua utilização humana dos rios. Os ferrões das raias causam lesões dolorosas, edema, necrose, e o muco que recobre toda a extensão do corpo desses peixes pode aumentar a gravidade desses ferimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta imunológica induzida pelo muco de Paratrygon aiereba nativo ou irradiado por raios gama de 60Co em modelos animais. Foram realizados ensaios imunoenzimáticos e Western blotting para verificar a resposta humoral e reatividade cruzada dos soros provenientes de camundongos Swiss e coelhos New Zealand previamente imunizados contra o veneno, muco nativo ou irradiado. A indução da produção de anticorpos in vitro, as subclasses de IgG e a quantificação de citocinas foram analisados. Além de realizados ensaios de soroneutralização da atividade edematogênica in vitro e in vivo e de viabilidade celular. Os dados foram analisados estatisticamente por meio de análise de variância. O protocolo de imunização possibilitou a obtenção de soros com títulos satisfatórios de anticorpos policlonais. O muco e veneno de P. aiereba são imunogênicos e apresentam reatividade antigênica. O muco nativo ou irradiado induziu a produção de anticorpos IgG e esses reconheceram antígenos presentes no muco de outras espécies de raias. Células esplênicas de animais imunizados contra o muco irradiado produziram IFN-γ, TNF- α e IL-10 e também foi observada a produção sérica de TNF-α (grupo imunizado contra o muco irradiado) e de IL-6 e IL-17 (grupo imunizado contra o muco nativo). O soro anti-muco irradiado reduziu a atividade edematogênica in vitro, ao contrária da in vivo que não foi neutralizada. Os resultados corroboram o uso da radiação ionizante, com produção de anticorpos altamente responsivos e melhor resposta imune, além de comprovar que o muco de Paratrygon aiereba foi capaz de estimular resposta imune adaptativa celular e humoral.
Comparative nephrotoxicity of native or Co-60 gamma rays irradiated crotoxin in mice
2015 - ROCHA, ANDRE M.; ROCHA, JOSEFA M.N.; MAGALHAES FILHO, ASTERIO S.; ALVES, GLAUCIE J.; AIRES, RAQUEL da S.; TURIBIO, THOMPSON O.; THOMAZI, GABRIELA O.C.; SPENCER, PATRICK J.; NASCIMENTO, NANCI do
Humoral immune response against native or sup(60)Co irradiated venm and mucus from stingray Paratrygon aiereba
2015 - THOMAZI, GABRIELA O.C.; ALVES, GLAUCIE J.; AIRES, RAQUEL da S.; TURBIO, THOMPSON de O.; ROCHA, ANDRE M.; SEIBERT, CARLA S.; SPENCER, PATRICK J.; NASCIMENTO, NANCI do