LARISSA MIRANDA PEREIRA

LARISSA MIRANDA PEREIRA

Página do item completo

Resultados de Busca

Agora exibindo 1 - 8 de 8

Structural characterization and enzymatic activity of the recombinant Ala959 to Ser1066 region of human ace
2017 - ELIASA, CAROLINE C.; PEREIRA, LARISSA M.; ARAGAO, DANIELLE S.; CASARINI, DULCE E.; AFFONSO, REGINA
Angiotensin-converting enzyme catalyzes the conversion of angiotensin I to the vasoconstrictor angiotensin II and the hydrolysis of bradykinin (BK). Human somatic angiotensin-converting enzyme has two homologous domains (N and C) that share 60% identity. Although these two regions have high homology, the catalytic site of the C-domain exhibits three-fold greater activity than the N-domain in the hydrolysis of angiotensin I in vivo. The present study aimed to obtain the Ala959 to Ser1066 catalytic region of the C-domain of angiotensin-converting enzyme in a structural conformation that resembles its native form. We amplified the 324-bp sequence corresponding to the catalytic site of C-domain of angiotensin-converting enzyme and cloned this sequence into a pET28 vector. The catalytic site of C-domain of angiotensin-converting enzyme peptide was expressed in a bacterial system, and its purification was performed in one step using a His-tag affinity column. Structural analysis by circular dichroism and fluorescence confirmed that the purified protein is correctly folded, and catalytic site of C-domain of angiotensin-converting enzyme possesses enzymatic activity and is inhibited by lisinopril. This peptide can be used to test new inhibitors and C-domain of angiotensin-converting enzyme substrates because this peptide is easy to produce and this has proven efficient link with these molecules.
Expression, characterization and enzymatic activity of the C-catalytic site of the angiotensin-converting enzyme I
2015 - ELIAS, C.C.; PEREIRA, L.M.; SANTANA, F.; SAMPAIO, S.B.; ARAGAO, D.S.; CASARINI, D.E.; AFFONSO, R.
A simple strategy for the purification of native recombinant full-length human RPL10 protein from inclusion bodies
2014 - PEREIRA, LARISSA M.; SILVA, LUANA R.; ALVES, JOSEANE F.; MARIN, NELIDA; SILVA, FLAVIO S.; MORGANTI, LIGIA; SILVA, ISMAEL D.C.G.; AFFONSO, REGINA
Expression and characterization of the human L10(QM) protein in E. coli
2010 - PEREIRA, L.M.
Cloning, expression, purification and structural evaluation of the jun oncoprotein
2012 - SILVA, S.F.; PEREIRA, L.M.; SARAIVA, K.W.; CHARRO, S.G.; AFFONSO, R.
Structural analysis of the human RPL10 protein expressed in bacterial culture in soluble form
2012 - PEREIRA, L.M.; SILVA, F.S.; SARAIVA, K.W.; CHARRO, S.G.; SILVA, I.D.C.G.; AFFONSO, R.
Characterization of recombinant full-length human protein RPL-10
2012 - PEREIRA, L.M.; SILVA, S.F.; SARAIVA, K.W.; ELIAS, C.C.; ALVES, M.M.; PEREIRA, V.S.; AFFONSO, R.
Clonagem, expressao, purificacao e caracterizacao estrutural da proteina ribossomal L10 humana recombinante
2009 - PEREIRA, LARISSA M.
A proteína ribossomal L10 (RP L10) é uma forte candidata a ser incluída na classe de proteínas supressoras de tumor. Também denominada QM, a proteína em questão é conhecida por participar da ligação das subunidades ribossomais 60S e 40S e da tradução de mRNAs. Possui massa molecular entre 24 a 26 kDa e ponto isoelétrico (pI) 10,5. A seqüência da proteína QM é bastante conservada em mamíferos, plantas, invertebrados, insetos e leveduras indicando que esta possui funções críticas na célula. Com função supressora de tumor, a proteína RP L10 foi estudada em linhagens de tumor de Wilm (WT-1) e em células tumorais de estômago, nas quais se observou uma diminuição na quantidade de seu mRNA. Mais recentemente a RP L10 foi encontrada em baixas quantidades nos estágios iniciais de adenoma de próstata e com uma mutação em câncer de ovário, indicando uma participação no desenvolvimento destas doenças. Como proteína, já foi descrito que esta interage com as proteínas c-Jun e c-Yes, inibindo a ação ativadora de fatores de crescimento e divisão celular. Este trabalho tem um papel importante no estabelecimento da expressão desta proteína solúvel, para estudos posteriores que tenham como objetivo avaliar a ação de regiões específicas que atuam na ligação das subunidades ribossomais 60S e 40S e tradução, bem como nas regiões que se ligam a proto-oncogenes. O cDNA para proteína QM foi amplificado por PCR e clonado no vetor de expressão periplásmica p3SN8. A proteína QM foi expressa em E.coli BL21 (DE3) no citoplasma e periplasma bacteriano e na melhor condição, a expressão de QM de bactérias transformadas pelo plasmídeo recombinante p1813_QM em 25°C ou 30°C, a proteína foi obtida solúvel e com quantidad es muito pequenas de contaminantes. Os ensaios de estrutura secundária demonstraram que a proteína QM tem predominância de a-hélice, mas quando do seu desenovelmento, essa condição muda e a proteína passa a ter característica de folhas β.