FERNANDA DOS SANTOS ARTHUSO

FERNANDA DOS SANTOS ARTHUSO

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Determination of recombinant Interferon-α2 in E. coli periplasmic extracts by reversed-phase high-performance liquid chromatography
2018 - DIAS, PAULO V.S.; ARTHUSO, FERNANDA S.; OLIVEIRA, JOAO E.; SUZUKI, MIRIAM F.; SOUSA, JOSE M.; RIBELA, MARIA T.C.P.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) has been used to analyze Interferon α-2 (IFN-α2) as a pure protein or as a pharmaceutical preparation: a method for analyzing periplasmic IFN-α2 directly in osmotic shock extract has, however, never been reported. This work describes an RP-HPLC methodology for the qualitative and quantitative analysis of human IFN-α2a and IFN-α2b directly in bacterial periplasmic extracts or in purified preparations. The analytical method has been set up and validated for accuracy, precision, linearity, sensitivity and specificity. A recovery test indicated an average bias of ∼1%, intra-day and inter-day quantitative determinations presented relative standard deviations always ≤ 5%, while the working sensitivity was of ∼0.3 μg of IFN-α2 (RSD =5%). The method proved to be suitable for detecting and quantifying also glycosylated and oxidized forms and N-methionylated IFN-α2 molecules, it was, however, not able to distinguish between IFN-α2a and IFN-α2b. This rapid methodology allows the application of RP-HPLC as a powerful tool to monitor the production yield and quality of IFN-α2 in osmotic shock fluids, right after, or even during the fermentation process.
Aplicação dos bioensaios com células Ba/F3-LLP e Nb2 na determinação da potência biológica da prolactina humana
2008 - ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOARES, CARLOS R.J.
Aplicação do bioensaio Ba/F3-LLP na determinação da potência biológica da prolactina humana glicosiladfa (G-hPRL)
2007 - ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOARES, CARLOS R.J.
Influência da temperatura de cultivo na expressão de proteínas recombinantes de interesse terapêutico no espaço periplásmico bacteriano, utilizando o promotor lambda PL
2015 - PEREZ, FERNANDA dos S.A.
O sistema de expressão baseado nos promotores PL ou PR do fago lambda que usualmente é regulado pelo repressor termo lábil (cIts) é amplamente utilizado para produzir proteínas recombinantes em células procarióticas. No entanto, o aumento da temperatura requerido neste sistema para promover a inativação do repressor apresenta algumas limitações, como o aumento da expressão de proteínas de HSP (Heat Shock Proteins), por exemplo, proteases, que dependendo da natureza da proteína expressa podem ser prejudiciais ou não. Uma outra limitação é a ativação da resposta SOS, resultando na parada da replicação do DNA celular ou dependendo da cepa pode ocorrer lise celular. Nesse trabalho nós descrevemos o uso do promotor λPL para expressão constitutiva, isto é, sem a regulação do repressor. Nós otimizamos diferentes condições de cultura para aumentar a secreção no espaço periplásmico de Escherichia coli de cinco proteínas: o hormônio do crescimento humano (hGH), que tem sido amplamente utilizado no tratamento de crianças com deficiência e/ou resistência ao hGH, síndrome de Turner, entre outras desordens; prolactina humana (hPRL), um hormônio polipeptídico conhecido por estimular a lactação e por exercer ação regulatória no crescimento e na diferenciação da glândula mamária, dois antagonistas de hPRL, estudados como potenciais fármacos para o tratamento de alguns tipos de cânceres e por fim o interferon α2a (IFN-α2a), que é uma citocina produzida pelas células, em resposta a diferentes estímulos, incluindo ácidos nucléicos virais, células estranhas (particularmente as neoplásicas), antígenos de bactérias, protozoários e vírus. No caso do IFN-α2a, essa citocina de alto valor agregado e de importante aplicação terapêutica, foi desenvolvida em nosso laboratório como parte desse trabalho, incluindo o desenvolvimento e a validação da metodologia de análise por HPLC de fase reversa para determinação do IFN presente no fluído periplásmico bacteriano ou na sua forma pura. As principais estratégias utilizadas para melhorar a expressão foram iniciar a indução junto à densidade óptica máxima do crescimento bacteriano e otimizar a temperatura de indução para controlar a expressão da proteína heteróloga. Essa metodologia pode ser utilizada nos casos onde o produto não será tóxico para a célula hospedeira ou quando a instabilidade do plasmídeo não é problema. A possibilidade de cultivo em temperaturas mais baixas, já que o repressor termo-sensível não se encontra presente, colaborou para o aumento significativo da expressão, mesmo para proteínas menos sensíveis à temperatura de cultivo, como o hGH.
The influence of Escherichia coli cultivation temperature on interferon alpha 2a expression (IFN-'alfa'2a)
2014 - ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SUZUKI, MIRIAM F.; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; OLIVEIRA, JOAO E. de; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
Expression and characterization of mouse prolactin (mPRL) in CHO dhfr-cells
2014 - SUZUKI, MIRIAM F.; SILVA, ALINE B. da; OLIVEIRA, JOAO E. de; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
A practical and fast adaptation of CHO cells expressing human prolactin to grow in suspension and its application to laboratory production
2011 - ARTHUSO, F.S.; CAPONE, M.V.N.; SUZUKI, M.F.; SOUSA, J.M.; OLIVEIRA, J.E.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.J.
Cycloheximide increases the synthesis of recombinant glycosylated human prolactin (G-hPRL) secreted by CHO cells
2008 - SOARES, C.R.J.; HELLER, S.R.; OLIVEIRA, T.L.; ARTHUSO, F.; GOULART, H.R.; BARTOLINI, P.
Influence of activation temperature on the degradation of recombinant proteins in E.coli
2008 - OLIVEIRA, T.L.; HELLER, S.R.; ARTHUSO, F.; SOARES, C.R.J.; BARTOLINI, P.
Purification and characterization recombinant glycosylated human prolactin synthesized in cho cells
2008 - OLIVEIRA, T.L.; HELLER, S.R.; OLIVEIRA, J.E.; ARTHUSO, F.S.; GOULART, H.R.; SOUSA, J.M.; SUZUKI, M.F.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.S.