Estudo da terapia fotodinâmica no tratamento de leishmaniose cutânea em um modelo murino

Abstract

Introdução: Leishmanioses são doenças infecto-parasitárias, de evolução crônica, desenvolvidas por protozoários do gênero Leishmania. A forma cutânea abrange lesões destrutivas e ulceradas com diversas limitações no tratamento. O surgimento de terapias alternativas é fundamental devido à grande relevância da doença e elevada incidência. Nesse contexto, a terapia fotodinâmica (PDT) tem sido introduzida como possibilidade terapêutica, em função do baixo custo, mínima toxicidade, praticidade e sem relatos de resistência na literatura. Objetivos:Avaliar os efeitos da PDT no tratamento de leishmaniose cutânea induzida em camundongos BALB/c. Métodos: Este estudo foi aprovado pelo CEUA/IPEN sob o no. 70/10.Culturas de L.(L.)amazonensis(IFLA/BR/67/PH8) foram mantidas a 25oC em meio Grace com 10% de soro fetal bovino. Para a infecção, foram utilizados 16 camundongos BALB/c com 8 semanas e massa aproximada de 30g. Foram inoculados 1x106parasitos no membro posterior esquerdo dos animais, que foram monitorados por 4 semanas. O tamanho de ambos os membros de cada animal foi mensurado com um paquímetro, semanalmente. Após a quarta semana de infecção, os animais foram submetidos à PDT (azul de metileno a 100 μM, λ= 660 nm) e divididos em 4 grupos (n=4) de acordo com a densidade de energia utilizada: 50 J/cm2(G50), 100 J/cm2(G100), 150 J/cm2(G150) e grupo controle (GC=animais infectados e não tratados). Os animais foram anestesiados (quetamina, 90mg/kg e xilazina,10mg/kg) e acompanhados durante 3 semanas pós-PDT para avaliar a evolução da lesão, dor e carga parasitária. Para estimar a altura da lesão, a diferença entre os dados obtidos da pata infectada e contralateral sem infecção foi calculada e normalizada. A avaliação da dor foi obtida através do método von Frey, que é um teste de pressão crescente utilizado em animais. Uma escala de dor de 1 a 6 foi estipulada (1= pouca e 6= grande sensibilidade). Para a carga parasitária, o tecido da lesão foi macerado, filtrado, centrifugado, ressuspendidoem meio e semeado em placas de 96 poços e realizada a diluição limitante até o último poço, com fator de diluição 10. A placa foi incubada a 25ºC por 7 dias. A análise estatística foi obtida no programa Prism6, com os testes Anova Two-WayeTukey. Os resultados foram considerados significativos quando p<0,05. Resultados:Os resultados indicaram que houve diferença estatística no tamanho da lesão entre os grupos GC e G150 (GC= 259,3%23,6, G150= 175%19,1), (GC= 292,1%51, G150= 195,3%32,1) 2 e 3 semanas após a PDT, respectivamente. Na escala de dor, observamos diferenças significativas entre GC e G150 (GC= 5,750,5, G150= 4,250,5), (GC= 6, G150= 1,250,5) após 2 e 3 semanas, respectivamente e GC e G100 após 3 semanas (GC= 6, G100= 4,250,5). Porém, nos resultados da carga parasitária não foi observada diferença significativa. Conclusão:O presente estudo mostrou que a terapia fotodinâmica reduziu o tamanho da lesão e aliviou a dor em leishmaniose cutânea induzida em camundongos, sugerindo que a PDT pode ter influenciado no processo inflamatório. Estes resultados encorajam mais estudos para compreensão dos mecanismos da PDT no tratamento de leishmaniose cutânea.