LUIS CLAUDIO SUZUKI
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Resumo IPEN-doc 27078 Investigação do efeito fotodinâmico em cepas de Candida albicans pré-tratadas com glicose2016 - OLIVEIRA-SILVA, T.; SUZUKI, L.C.; LEAL, C.R.L.; KATO, I.T.; ALVARENGA, L.H.; RIBEIRO, M.S.; PRATES, R.A.Introdução: Candida albicans é um micro-organismo comensal presente em 80% dos indivíduos. No entanto, sua natureza oportunista pode causar severas infecções, sendo responsável por 15% dos casos de septicemia. Pode atingir indivíduos imunocompententes e imunossuprimidos, causando infecções mais graves no segundo grupo. Sua alta patogenicidade está relacionada a sua capacidade formar biofilme, uma estrutura complexa capaz de proteger C. albicans de condições ambientais desfavoráveis. O tratamento convencional com azóis não tem se mostrado eficiente devido ao aumento da expressão dos sistemas de transporte por membrana da família ABC (ATP Binding Cassette Transportes). Frente ao cenário de resistência microbiana, há necessidade de investigar novas alternativas. Uma fototerapia promissora é a terapia fotodinâmica (PDT, do inglês phodynamic therapy) que baseia-se na utilização de luz e fotossensibilizador (FS) na presença de oxigênio, formando espécies reativas de oxigênio que podem causar danos letais às células. C. albicans apresenta sensores de glicose relacionado ao seu dimorfismo (levedura-hifa), sua resposta à presença da glicose é pouco conhecida, mas acredita-se que gera um sinal intracelular que ativa os sistemas de transporte. Sendo assim, o objetivo este trabalho foi avaliar o papel da glicose ativação de uma via de entrada de fotossensibilizador para o citoplasma fúngico. Materiais e Métodos: Para o desenvolvimento do estudo, foram selecionadas as cepas ATCC 10231, YEM 13 superexpressora de poros de difusão facilitada por membrana e sua cepa selvagem YEM 12; YEM 15 superexpressora de bombas de transporte ativo e sua cepa selvagem YEM 14. C. albicans foram cultivadas aerobicamente em ágar Sabouraud e incubadas a 30°C por 24h. Os inóculos microbianos foram divididos em 4 grupos: Controle sem tratamentos; grupo irradiado sem fotossensibilizador; toxicidade do fotossensibilizador (FS) e 3 grupos PDT com irradiação de 1, 3 e 6 min. Azul de metileno na concentração final de 100μM foi utilizado como fotosensitilizador. Todos os experimentos foram realizados com e sem glicose a 50 mM. Cada experimento foi repedido pelo menos 3 vezes. Após passar pelos tratamentos, as unidades formadoras de colônia foram contadas e os dados foram submetidos à análise estatística (ANOVA) e teste de Tukey. Resultados: Os grupos irradiados sem FS não apresentaram inativação quando comparados ao grupo controle, bem como o azul de metileno não se mostrou tóxico nos parâmetros adotados no estudo. No entanto, a PDT causou morte celular proporcional a quantidade de luz entregue ao sistema. A cepa ATCC 10231 apresentou total inativação celular nos grupos com e sem glicose a partir de 3 min de irradiação. Por outro lado, as diferenças na inativação das cepas YEM 12/13 demonstram que a presença da glicose aumenta a entrada de FS e consequentemente aumenta a resposta à PDT. De maneira contrária, nas cepas YEM 14/15, a glicose promove uma espécie de proteção contra a ação da PDT. Isso pode ser relacionado à presença de bombas de transporte ativo, que com mais glicose disponível, podem bombear o FS do citoplasma. A compreensão do papel da glicose na inativação de leveduras pode elucidar mecanismos metabólicos de resposta à PDT e ser uma ferramenta importante na criação de modelos de estudos no desenvolvimento de técnicas antimicrobianas. Conclusões: A presença de glicose pode ativar a entrada de azul de metileno no citoplasma fúngico e aumentar o efeito fotodinâmico. Por outro lado, a mesma presença de glicose pode ativar bombas de efluxo na membrana da levedura e expulsar fotossensibilizador de dentro do fungo.Artigo IPEN-doc 25857 Effect of photodynamic antimicrobial chemotherapy on Candida albicans in the presence of glucose2019 - OLIVEIRA-SILVA, TAMIRES de; ALVARENGA, LETICIA H.; LIMA-LEAL, CINTIA; GODOY-MIRANDA, BIANCA; CARRIBEIRO, PAMELA; SUZUKI, LUIS C.; RIBEIRO, MARTHA S.; KATO, ILKA T.; PAVANI, CHRISTIANE; PRATES, RENATO A.Background: Candida albicans is an opportunistic commensal microorganism, often associated with severe infections in immunosuppressed individuals. C. albicans has hexose transporters that may favor the intracellular accumulation of photosensitizer (PS). the aims of this study were to investigate the influence of glucose load on photodynamic antimicrobial chemotherapy (PACT); and the role that membrane transport system plays on this therapy in the presence of glucose. Material and methods: Strains of C. albicans were selected: ATCC 10231, YEM 12, YEM 13, YEM 14 and YEM 15. All strains were grown aerobically on Sabouraud agar and incubated at 30 °C for 24 h. The strains were treated with and without glucose, and divided into Control (no treatment), LED light (660 nm, 166 mW/cm2), Photosensitizer (100 μM methylene blue) and PACT at 1, 3 and 6 min of irradiation groups. The colony forming units were counted and data submitted to statistical analysis (ANOVA) and Tukey's test. The concentration of methylene blue (MB) outside the yeast was measured by fluorescence spectroscopy. Results: PACT inactivate C. albicans and the presence of glucose did not affect the killing effect for most strains. Only YEM12 was partially affected by its presence. Regarding efflux systems, ABC overexpressing strain showed a protective effect on the yeast cells. We observed that yeast with overexpression of major facilitator superfamily (MFS) membrane pore tended to accumulate more MB in its cytoplasm, whereas strains that overexpressed ABC pumps (ATP-binding cassette transporters) tended to decrease MB uptake and survive the photodynamic challenge. Conclusion: Presence of glucose showed a small effect on PACT . The accumulation of MB on yeast induces more photodynamic inactivation; however, the photodynamic efficacy depends on the type and characteristics of the microbial strain.Resumo IPEN-doc 24879 Sensitization of glucose sensors as a pathway for increased uptake of methylene blue in Candida albicans with multidrug efflux systems2017 - OLIVEIRA-SILVA, T.; LIMA-LEAL, C.R.; ALVARENGA, L.H.; SUZUKI, L.C.; KATO, I.T.; RIBEIRO, M.S.; PRATES, R.A.Artigo IPEN-doc 23075 The In Situ effect of titanium tetrafluoride gel on erosion/abrasion progression in human dentin2017 - MANTILLA, TAIS F.; TURSSI, CECILIA P.; RAMOS-OLIVEIRA, THAYANNE M.; SILVA, CAMILA V. da; SUZUKI, LUIS C.; FREITAS, PATRICIA M. deErosion incidence is increasing and its control is still a challenge in clinical practice. This study evaluated 4% TiF4-gel effects on eroded human dentin subjected to in situ erosive/ abrasive episodes. Seventy-two previously eroded dentin slabs (0.05 M citric acid, pH 2.3, 20 min) were allocated to 6 groups (n=12) according to the treatment to be performed during the in situ phase and number of erosive/abrasive cycles, as follows: 4% TiF4-gel applied once (TiF41), twice (TiF42) or three times (TiF43) followed by 1, 2 and 3 erosive/ abrasive cycles, respectively. Gel was applied before the beginning of the next cycle. Control groups were subjected to 1 (C1), 2 (C2) and 3 (C3) erosive/abrasive cycles only. A seventh group (n=12) comprised in vitro uneroded samples (UN) subjected to 3 erosive/ abrasive cycles. Each cycle corresponded to 2 days of erosive (citric acid 0.5%, pH 2.6, 6x/day) and abrasive (electric toothbrush, 10 s/sample, 1 x/day) challenges. Samples were evaluated under profilometry and environmental scanning electron microscopy (ESEM). Atomic force microscopy images (AFM) were also made (n=3). Repeated measures 2-way ANOVA and Tukey test (p<0.001) showed that TiF42, which did not differ from TiF41 and TiF43, revealed a significant reduction in surface loss compared to all control groups. TiF41 and TiF43 showed no significant difference from C1, but both groups demonstrated significantly smaller surface loss than C2 and C3. ESEM and AFM micrographs suggested alterations on treated surfaces compared to samples from control groups, showing reduced diameters of dentinal tubules lumens. Therefore, TiF4 was able to reduce the progression of erosive/abrasive lesions.Artigo IPEN-doc 23888 Inhomogeneity in optical properties of rat brain: a study for LLLT dosimetry2013 - SOUSA, MARCELO V.P.; PRATES, RENATO; KATO, ILKA T.; SABINO, CAETANO P.; YOSHIMURA, TANIA M.; SUZUKI, LUIS C.; MAGALHAES, ANA C.; YOSHIMURA, ELISABETH M.; RIBEIRO, MARTHA S.Over the last few years, low-level light therapy (LLLT) has shown an incredible suitability for a wide range of applications for central nervous system (CNS) related diseases. In this therapeutic modality light dosimetry is extremely critical so the study of light propagation through the CNS organs is of great importance. To better understand how light intensity is delivered to the most relevant neural sites we evaluated optical transmission through slices of rat brain point by point. We experimented red (λ = 660 nm) and near infrared (λ = 808 nm) diode laser light analyzing the light penetration and distribution in the whole brain. A fresh Wistar rat (Rattus novergicus) brain was cut in sagittal slices and illuminated with a broad light beam. A high-resolution digital camera was employed to acquire data of transmitted light. Spatial profiles of the light transmitted through the sample were obtained from the images. Peaks and valleys in the profiles show sites where light was less or more attenuated. The peak intensities provide information about total attenuation and the peak widths are correlated to the scattering coefficient at that individual portion of the sample. The outcomes of this study provide remarkable information for LLLT dose-dependent studies involving CNS and highlight the importance of LLLT dosimetry in CNS organs for large range of applications in animal and human diseases.Artigo IPEN-doc 23521 Glucose modulates antimicrobial photodynamic inactivation ofCandida albicans in biofilms2017 - SUZUKI, LUIS C.; KATO, ILKA T.; PRATES, RENATO A.; SABINO, CAETANO P.; YOSHIMURA, TANIA M.; SILVA, TAMIRES O.; RIBEIRO, MARTHA S.Candida albicans biofilm is a main cause of infections associated with medical devices such as catheters,contact lens and artificial joint prosthesis. The current treatment comprises antifungal chemotherapy thatpresents low success rates. Photodynamic inactivation (PDI) involves the combination of a photosensitiz-ing compound (PS) and light to generate oxidative stress that has demonstrated effective antimicrobialactivity against a broad-spectrum of pathogens, including C. albicans. This fungus senses glucose induc-ing an upregulation of membrane transporters that can facilitate PS uptake into the cell. The aim ofthis study was to evaluate the effects of glucose on methylene blue (MB) uptake and its influence onPDI efficiency when combined to a red LED with central wavelength at = 660 nm. C. albicans biofilmswere grown on hydrogel disks. Prior to PDI assays, MB uptake tests were performed with and withoutglucose-sensitization. In this system, the optimum PS administration was determined as 500 M of MBin contact with the biofilm during 30 min before irradiation. Irradiation was performed during 3, 6, 9, 12,15 and 18 min with irradiance of 127.3 mW/cm2. Our results showed that glucose was able to increaseMB uptake in C. albicans cells. In addition, PDI without glucose showed a higher viability reduction until6 min; after 9 min, glucose group demonstrated a significant decrease in cell viability when compared toglucose-free group. Taken together, our data suggest that glucose is capable to enhance MB uptake andmodulate photodynamic inactivation of C. albicans biofilm.Artigo IPEN-doc 20784 Estudo comparativo entre dois comprimentos de onda no efeito fotodinâmico em biofilmes de Candida albicans2014 - SUZUKI, L.C.; YOSHIMURA, T.M.; KATO, I.T.; PRATES, R.A.; RIBEIRO, M.S.Tese IPEN-doc 20735 Estudo in vitro da terapia fotodinâmica antimicrobiana em Candida albicans mediada por azul de metileno e glicose2015 - SUZUKI, LUIS C.Neste estudo foi proposto um modelo de formação de biofilme fúngico formado por Candida albicans em dois diferentes substratos associado ou não à glicose para o estudo dos efeitos da terapia fotodinâmica (PDT) utilizando o azul de metileno (AM) como fotossensibilizador, avaliando os efeitos de dois comprimentos de onda distintos incluindo a investigação na captação do AM quando sensibilizados previamente com a glicose. Foi avaliada a susceptibilidade da levedura em suspensão de células crescidas por 24 h (início da fase estacionária) com e sem a adição prévia da glicose. Foram investigadas duas linhagens de C. albicans para a padronização do biofilme, ATCC 90028 e ATCC 10231. Com os biofilmes formados, avaliamos a captação de AM para determinarmos a mais eficiente concentração e tempo de pré-irradiação (PIT). Por último, avaliamos sua sensibilidade à PDT em dois comprimentos de onda distintos (λ = 645 nm e λ = 660 nm) em função do tempo de irradiação (potência = 16 mW, taxa de fluência = 127,3 mW/cm2). A linhagem de célula que possibilitou a formação de biofilme foi a ATCC 10231 em discos de hidrogel. A menor concentração que possibilitou uma melhor captação do AM foi de 500 μM com um PIT de 30 min e em contato prévio com a glicose 50 mM por 90 min. O comprimento de onda mais eficiente, que promoveu redução em leveduras e biofilmes foi o de λ = 660 nm, reduzindo melhor no estudo de leveduras quando sensibilizados com glicose. Nos biofilmes, a redução foi iniciada mais precocemente sem a adição de glicose (com 6 min de irradiação e fluência = 46 J/cm2), porém, em 12 min (fluência = 92 J/cm2) o grupo com glicose passou a ter maior eficiência.Artigo IPEN-doc 20714 Aggregatibacter actinomycetemcomitans biofilm can be inactivated by methylene blue-mediated photodynamic therapy2015 - ALVARENGA, LETICIA H.; PRATES, RENATO A.; YOSHIMURA, TANIA M.; KATO, ILKA T.; SUZUKI, LUIS C.; RIBEIRO, MARTHA S.; FERREIRA, LUIS R.; PEREIRA, SILVIO A. dos S.; MARTINEZ, ELIZABETH F.; SABA CHUJFI, EDUARDOCapítulo IPEN-doc 15975 Dosimetria na terapia com laser em baixa intensidade2010 - SILVA, DANIELA de F.T.; NUNEZ, SILVIA C.; SUZUKI, LUIS C.; RIBEIRO, MARTHA S.
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