RAQUEL BENEDETTO
9 resultados
Resultados de Busca
Agora exibindo 1 - 9 de 9
Artigo IPEN-doc 28654 In vitro and in vivo response of PSMA-617 radiolabeled with CA and NCA lutetium-1772022 - BOAS, CRISTIAN A.W.V.; SILVA, JEFFERSON de J.; DIAS, LUIS A.P.; FREIRE, MARIA R.B.; BALIEIRO, LUIZA M.; SANTOS, CAROLINA S.F. dos; VIVALDINI, BIANCA F.; BENEDETTO, RAQUEL; VIEIRA, DANIEL P.; PASSOS, PRISCILA de Q.S.; MARUMO, MARIA H.; TEIXEIRA, LUIS F.S.; ARAUJO, ELAINE B. deThe PSMA-targeted radionuclide therapy has been explored since 2015 with radioisotope lutetium-177, whose β− emission range is adequate for micrometastases treatment. This radioisotope is obtained by two different production routes that directly affect the specific activity of lutetium-177 (non-carrier added and carrier added) and, consequently, the specific activity of radiopharmaceuticals, like 177Lu-PSMA-617. The influence of the specific activity of lutetium-177 on the properties of the radiopharmaceutical PSMA-617 was evaluated through pre-clinical studies. The in vitro study pointed to a lower constant of dissociation with non-carrier added lutetium-177 due to the difference in the specific activity. However, competition and internalization assays resulted in similar results for both lutetium-177. Based on these pre-clinical experiments, the total in vitro tumor cell binding and tumor uptake in vivo were similar, with no influence of the specific activity of the 177Lu-PSMA-617. Regardless the specific activity did not directly affect tumor uptake, the tumor/non-target organs ratios were higher for the radiopharmaceutical labeled with carrier added lutetium-177, which had the lowest specific activity.Resumo IPEN-doc 26856 177Lu-PSMA-6172019 - BOAS, CRISTIAN W.V.; SILVA, JEFFERSON de J.; BENEDETTO, RAQUEL; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. deIntroduction: PSMA-617 radiolabeled with lutetium-177 has shown good results in compassionate studies around the world, and there is great interest in this kind of therapy in Brazil. The Nuclear and Research Institute (IPEN-CNEN) in São Paulo city, is a national radiopharmaceutical producer and the distribution of radiopharmaceuticals for therapy in a country of continental dimensions such as Brazil, becomes a challenge from the standpoint of guaranteeing the stability of the product. This work evaluated the scheduling of pilot batches for the production of 177Lu-PSMA-617 and studied the effect of dilution and freezing on the stability of mono-doses of the product. Materials and Methods: Radiolabeling of PSMA-617 (ABX, Germany) with lutetium-177 (JSC, Russia) was performed in heating block at 90 °C for 30 minutes, 37 GBq (1 Ci), 500 μg of peptide and sodium ascorbate (0,5 M pH 4,7) as buffer. At the end of the radiolabel, 0,5 mL of DTPA solution (4 mg/mL pH 4,5) was added and the product was diluted with an appropriate volume of saline solution 0,9%. The final product was filtrated in 0.22 membrane and the doses were fractionated (7,4 GBq calibrated for 24 hours in approximately 2,4 mL) and conditioned in appropriate lead chambers inside a dry ice bucket for transport simulation. The radiochemical purity (RP) was evaluated in a stability study at, 24 and 48 hours by TLC and HPLC. The radionuclidic purity, sterility and bacterial endotoxins were also evaluated. Results and discussion: The radiopharmaceutical was stable after 48 hours (99.47% TLC and 99.39% HPLC), and was approved in radionuclidic, sterility and endotoxins assays. The vials fractionated in mono-doses calibrated for 24 hours showed high stability through freezing and dilution, which allowed the transportation to the Cancer Hospital of Barretos, distant 420 km from the production center in São Paulo. All these mono-doses were administrated to the patients after 24 hours of the production. Also, these results denote that is possible to scale up this production until 74 GBq and be used in a clinical trial that is being planned. Conclusions: These carried out experiments demonstrated that it is possible to produce 177Lu-PSMA-617 for use in clinical trials in Brazil. Until now, four patients are under treatment (compassionate use). Also, these results demonstrate that it is still possible to increase production activity to 74 GBq, just like is normally done with 177Lu-DOTATATE.Artigo IPEN-doc 25851 Zr-89-DFO-cetuximab as a molecular imaging agent to identify cetuximab resistance in head and neck squamous cell carcinoma2019 - BENEDETTO, RAQUEL; MASSICANO, ADRIANA V.F.; CRENSHAW, BRYANT K.; OLIVEIRA, RENATO; REIS, RUI M.; ARAUJO, ELAINE B.; LAPI, SUZANNE E.Background: Despite the improvement in clinical outcomes for head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) as the result of cetuximab, patients may present with or develop resistance that increases tumor recurrence rates and limits clinical efficacy. Therefore, identifying those patients who are or become resistant is essential to tailor the best therapeutic approach. Materials and Methods: Cetuximab was conjugated to p-NCS-Bz-DFO and labeled with 89Zr. The resistance model was developed by treating FaDu cells with cetuximab. Western blotting (WB) and specific binding assays were performed to evaluate epidermal growth factor receptor (EGFR) expression and 89Zr-DFO-cetuximab uptake in FaDu cetuximab-resistant (FCR) and FaDu cetuximab-sensitive (FCS) cells. Positron emission tomography imaging and biodistribution were conducted in NU/NU nude mice implanted with FCR or FCS cells. Results: Cetuximab was successfully radiolabeled with 89Zr (‡95%). Binding assays performed in FCR and FCS cells showed significantly lower 89Zr-DFO-cetuximab uptake in FCR ( p < 0.0001). WB suggests that the resistance mechanism is associated with EGFR downregulation ( p = 0.038). This result is in agreement with the low uptake of 89Zr-DFO-cetuximab in FCR cells. Tumor uptake of 89Zr-DFO-cetuximab in FCR was significantly lower than FCS tumors ( p = 0.0340). Conclusions: In this work, the authors showed that 89Zr-DFO-cetuximab is suitable for identification of EGFR downregulation in vitro and in vivo. This radiopharmaceutical may be useful for monitoring resistance in HNSCC patients during cetuximab therapy.Artigo IPEN-doc 25585 Avaliação pré-clínica do potencial de inibidor do antígeno de membrana prostático específico (PSMA) radiomarcado com lutécio-177 no tratamento do câncer de próstata2018 - SILVA, JEFFERSON de J.; MASSICANO, ADRIANA V.F.; ALCARDE, LAIS F.; BENEDETTO, RAQUEL; BOAS, CRISTIAN A.W.V.; DIAS, LUIS A.P.; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. deDiversos radiofármacos PSMA-específicos têm sido apresentados como proposta para o diagnóstico do câncer de próstata, bem como para o tratamento de pacientes com câncer metastático resistente à castração e às terapias convencionais. Este trabalho estudou a marcação e estabilidade radioquímica do inibidor do receptor PSMA, Glu-NH-CO-NH-Lys(Ahx)-DOTA com 177Lu (PSMA-DOTA-177Lu), e realizou estudos pré-clínicos para avaliar seu potencial para a terapia do câncer de próstata. O radiofármaco foi obtido com pureza radioquímica elevada (PR > 95%) em todas as condições de marcações estudadas e permaneceu estável quando armazenado sob congelamento por até 48 horas, mesmo com atividade específica alta (74 MBq/μg). O ensaio de ligação específica do PSMA-DOTA-177Lu mostrou fração significativa de ligação às células LNCaP de tumor de próstata, exclusivamente à superfície celular. Os parâmetros farmacocinéticos determinados no estudo in vivo em camundongos BALB/c são compatíveis com o rápido clareamento sanguíneo e excreção renal. O radiofármaco demonstrou alta estabilidade em soro humano in vivo por um período de até 24 horas, que foi confirmada pela baixa captação óssea demonstrada nos estudos in vivo de biodistribuição. Os resultados favoráveis deste estudo sugerem a realização de ensaio clínico controlado deste novo radiofármaco para avaliar seu potencial no tratamento do câncer de próstata.Artigo IPEN-doc 24713 Development of radioimmunoconjugate for diagnosis and management of head-and-neck subclinical cancer and colorectal carcinoma2018 - BENEDETTO, RAQUEL; MASSICANO, ADRIANA V.F.; SILVA, JEFFERSON J.; BOAS, CRISTIAN A.W.V.; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. deScientific innovations in diagnostic methods are important drivers of cancer control and prevention. Noninvasive imaging of the epidermal growth factor receptor (EGFR) in head-and-neck squamous, cell carcinoma and colorectal cancer could be valuable to select patients for EGFR-targeted therapy, as well as to monitor the efficacy and occurrence of resistance to immunotherapy. In order to develop the first Brazilian radioimmunoconjugate for diagnosis, Cetuximab has been conjugated to p-SCN-Bn-DTPA chelator and radiolabeled with Indium-111. The conjugation methodology was optimized using different mAb:DTPA molar ratios, time was then reduced for immunoconjugate preparation, besides the protein recovery’ percentage increased after purification (m = 83.8 ± 0.91 %). The stability of Cetuximab-DTPA at – 20 oC was evaluated for six months, and its integrity was greater than 90% (m =93.9 ± 1.5%, N = 24). The radioimmunoconjugate with specific activity of 185 MBq/mg showed radiochemical purity above 95% (m=96.8 ± 1.31 %, N = 15). We conclude that the radioimmunoconjugate 111In-DTPA-cetuximab is stable and may be applied to the diagnosis of EGFR-positive tumors.Resumo IPEN-doc 24644 Desenvolvimento do radioimunoconjugado, CETUXIMABE-DTPAIN111, para estratificação de pacientes à terapia dirigida ao EGFR2017 - BENEDETTO, RAQUEL; MASSICANO, ADRIANA V.; REIS, RUI M.; OLIVEIRA, RENATO; SILVA, JEFFERSON J.; BOAS, CRISTIAN A.W.V.; TURANO, WALTER; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. deIntrodução: Anticorpos (AcM) radiomarcados permitem a entrega seletiva da radiação ao alvo de interesse. O receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), superexpresso em malignidades epiteliais como câncer de cabeça e pescoço (HNSCC), desempenha papel central na proliferação celular. Apesar dos ganhos clínicos decorrentes do uso de cetuximabe (cetux), AcM que se liga ao EGFR, alguns mecanismos de resistência foram caracterizados. A metodologia Radioimunodiagnóstico com cetux radiomarcado (1) pode avaliar a resistência ao tratamento; (2) estratificar pacientes que possam beneficiar-se da Imunoterapia; (3) monitorar a progressão da terapia para um tratamento efetivo e direcionado, com a abordagem da medicina personalizada. Objetivos: Desenvolver radiofármaco, Cetux-DTPA-111In para diagnóstico de HNSCC e câncer colorretal e, através da avaliação dos mecanismos de resistência, selecionar pacientes para terapia. Métodos: O AcM foi conjugado ao quelante DTPA na razão molar 1:20. A pureza radioquímica e estabilidade do radiofármaco foram avaliadas por cromatografia -CLAE.A concentração proteica do imunoconjugado foi determinada pelo método BCA e o número de quelantes acoplado ao AcM foi definido por espectrometria de massas (MALDI/TOF). O ensaio de ligação específica in vitro foi realizado com as células FaDu-P(Parental) e FaDu-C10(resistente). Os estudos de biodistribuição foram conduzidos em camundongos machos Balb/c sadios (4-8 semanas;13-21g), e Scid, modelo tumoral desenvolvido por injeção subcutânea de FaDu-P(flanco esquerdo) e FaDu-C10(flanco direito), nos intervalos de tempo de 3,24,72 horas, 5 e 7 dias, e imagens realizadas em MicroSPECT/CT, Albira -Protocolo nº122/13 CEUA/IPEN. Os camundongos foram injetados com 55 MBq do radioimunoconjugado e eutanasiados após 24,72 horas, 5, 7 dias para estudo de atividade captada/grama de tecido (%Al/g). Resultados: O imunoconjugado, cetux–DTPA, apresentou estabilidade (-20°C, > 6 meses). A concentração de proteínas foi 4,54±0,22mg/mL, com recuperação proteica acima de 83%(N=15). De 6 a 7 quelantes DTPA foram introduzidos no AcM. O percentual de ligação específica às células FaDu-P do Cetux-DTPA-111In foi expressivo e proporcional ao aumento do número de células. A fração imunorreativa foi 93,1%. No ensaio de internalização às células FaDu-P, observou-se fração da ligação de superfície de 86,09±0,72% e percentual de internalização de 14±0,75%. O estudo de ligação às células FaDu-C10 demonstrou inexpressivo % de ligação, comprovando o modelo de resistência conferido a esta linhagem.No estudo de biodistribuição, o fígado e pulmões resultaram em captações de 21,5±1,3 e 19,3±0,8, respectivamente, para 24 horas. A captação óssea foi baixa atestando a estabilidade in vivo do radiofármaco. O melhor intervalo para avaliação clínica é de 5 dias pós-injeção do radiofármaco.A imagem metabólica demonstrou captação do radiofármaco apenas no tumor desenvolvido pela FaDu-P, comprovando sensibilidade e especificidade do radiofármaco para imunodiagnóstico. Conclusão: A obtenção do radiofármaco para radioimunodiagnóstico Cetux-DTPA-111In é viável, com potencial para aplicação no diagnóstico HNSCC e câncer colorretal, além da seleção de pacientes para terapia com cetux, encorajando a continuidade de estudos clínicos.Resumo IPEN-doc 24642 Otimização das condições de marcação do PSMA-617-DOTA com lutécio-1772017 - BOAS, CRISTIAN A.W.V.; SILVA, JEFFERSON de J.; BENEDETTO, RAQUEL; DIAS, LUIS A.P.; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. deIntrodução: O câncer de próstata é a segunda neoplasia mais frequente e a quinta que mais mata pacientes do sexo masculino (Int. J. Cancer 136:359, 2015). Levantamento do Instituto Nacional do Câncer (INCA) indicou que em 2016 devem ter surgidos mais de 61 mil novos casos desta neoplasia no Brasil. Novos radiofármacos para o tratamento do câncer de próstata foram concebidos com base no grupo farmacofórico Glutamato-Ureia-Lisina, que se liga especificamente ao PSMA (Prostate Specific Membrane Antigen), superexpresso em células de tumor de próstata. O PSMA- 617-DOTA marcado com lutécio-177 tem sido bastante estudado e empregado clinicamente na Alemanha na terapia do câncer de próstata. Objetivo: Avaliar as condições de marcação do PSMA-617-DOTA com Lutécio-177 bem como definir os métodos de controle de qualidade de pureza radioquímica. Metodologia: A condição de marcação de PSMA-617-DOTA (ABX, Alemanha) com lutécio-177 (IDB, Holanda) foi estudada considerando diferentes temperaturas (85 ºC, 90 ºC e 95 ºC) e tempos (15 minutos, 30 minutos e 45 minutos). Em cada marcação foram utilizados 10 μg de peptídeo, e 555 MBq (15mCi) de lutécio-177, utilizando-se tampão ascorbato de sódio pH 4,75 0,52 M. Todas as marcações foram realizadas em triplicata e os controles de pureza radioquímica (PR) foram feitos imediatamente após a marcação por cromatografia em camada delgada (tampão citrato de sódio 0,1M, pH 5,0) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) (0-2min 17%B; 2-5,99min 30%B; 6-20min 17%B, (fluxo 0,4mL/min, A = H2O/0,1 %TFA, B = ACN/0,1 %TFA, coluna RP18 5μm 4,6x150mm). Resultados e Discussão: O estudo possibilitou analisar a marcação do PSMA-617-DOTA sob diferentes condições de tempo e temperatura, visando avaliar a robustez do método. Realizando a marcação à 85ºC pode-se observar que houve um incremento da pureza radioquímica com a aumento no tempo de marcação, obtendo-se purezas radioquímicas de 95,7 ± 4,2 (15 minutos), 97,9 ± 0,3 (30 minutos) e 98,4 ± 1,0 (45 minutos). Com a temperatura de 90ºC na marcação, as purezas radioquímicas foram de 98,0 ± 0,1 com 15 minutos, 99,9 ± 0,1 com 30 minutos e 99,2 ± 0,2 com 45 minutos de marcação. Realizando a mesma marcação com 95ºC obteve-se purezas radioquímicas de 98,4 ± 0,1 (15 minutos), 99,6 ± 0,2 (30 minutos) e 99,1 ± 0,1 (45 minutos). Corrida de CLAE foi realizada com a marcação obtida à 90ºC e 30 minutos e obteve-se pico único de 100% com 10,7 minutos de corrida. Conclusões: Por meio do presente trabalho foi possível concluir que a melhor condição de marcação do PSMA-617-DOTA com lutécio foi 90 ºC por 30 minutos (p =0,008). A marcação realizada à 90 ºC por 45 também apresentou excelente resultado (p=0,02), contudo demanda tempo maior de marcação. Os métodos cromatográficos selecionados possibilitaram avaliar a %PR das marcações com resolução adequada das espécies. Encoraja-se também a realização de estudos para determinação da atividade específica, realizar marcações em escala de produção, estudos de estabilidade do radiofármaco e bem como avaliar as propriedades do PSMA-617-DOTA-177Lu em modelos in vitro e in vivo.Resumo IPEN-doc 24639 Radiomarcação de inibidor de PSMA com 177Lu e avaliação biológica do potencial para aplicação no tratamento do câncer de próstata2017 - SILVA, JEFFERSON de J.; MASSICANO, ADRIANA V.; BENEDETTO, RAQUEL; BOAS, CRISTIAN A.W.V.; DIAS, LUIS A.P.; MENGATTI, JAIR; ARAUJO, ELAINE B. de; ALCARDE, LAIS F.Introdução: Em razão do antígeno de membrana prostático específico (PSMA) ser superexpresso em praticamente todas as neoplasias da próstata, de seus possíveis papéis na malignidade destas, assim como na angiogênese de tumores sólidos e sua expressão em tecidos extra prostáticos ser altamente restrita, este representa um ótimo alvo para novos métodos de diagnóstico por imagem e terapia antineoplásica. Objetivo: Estudar de forma inédita a marcação e estabilidade radioquímica do Glu-NH-CO-NHLys( Ahx)-DOTA com 177Lu e avaliar seu potencial para a terapia do câncer de próstata. Métodos: A partir da condição padrão de marcação (90°C; 10μg de peptídeo e 30 minutos de reação) avaliou-se o efeito da atividade crescente de 177LuCl3 sobre a pureza radioquímica (PR). Após armazenar a -20°C e a 37°C em soro humano, a estabilidade do radiofármaco foi avaliada. Foram conduzidos ensaios com células tumorais para determinar a % de ligação específica. Por fim, foram conduzidos estudos de biodistribuição e farmacocinética em camundongos sadios Balb/c machos e biodistribuição em camundongos scids machos com tumor LNCaP (idade 7-12 semanas e peso 13-30g) - Protocolo nº115/2015 do CEUA/IPEN. Resultados: O radiofármaco foi obtido com pureza radioquímica elevada (PR >95%) em todas as condições estudadas e a estabilidade do radiofármaco (-20°C) permaneceu inalterada até 48 horas, mesmo em alta atividade específica (74 MBq/μg). O produto manteve-se estável quando incubado em soro humano. O ensaio de ligação específica do PSMA-DOTA-177Lu mostrou que a fração do peptídeo que se ligou às células foi de 1,79±0,21%, 2,47±0,03%, 3,07±0,01% e 4,13±0,27%, para as concentrações de 0,15x106, 0,3x106, 0,5x106 e 1x106 de células LNCaP, respectivamente (n=3). O ensaio de internalização do PSMA-DOTA-177Lu sugere que o maior percentual da ligação especifica do radiofármaco às células LNCaP corresponde à fração da ligação de superfície (99,03±0,84%) (n= 8). Os parâmetros farmacocinéticos foram determinados no estudo in vivo: t1/2α 2.92min, t1/2β 20.04min, CL 0.21mL.min-1 e Vd 1.07L.Kg-1 (n=5), compatíveis com o rápido clareamento sanguíneo e excreção renal (n=5). Nos estudos em animais com tumor, o PSMADOTA- 177Lu apresentou captação tumoral após 4 horas da administração endovenosa do radiofármaco de 2,76±1,0 %AI/g de (n=3). Conclusão: O estudo de variação da atividade possibilitou estabelecer a atividade específica ideal (MBq/μg), que será extrapolada para um piloto de produção do radiofármaco. O radiofármaco apresentou rápido clareamento sanguíneo e apreciável captação tumoral in vivo após 4 horas de administração. Os resultados favoráveis encorajam para perspectiva de ensaio clínico controlado de um novo radiofármaco, avaliando seu potencial para aplicação no tratamento do câncer de próstata.Tese IPEN-doc 24470 89Zr-Imuno-PET/111In-Imuno- SPECT: desenvolvimento radiofarmacêutico de agentes de imagem molecular para receptores EGF2017 - BENEDETTO, RAQUELA baixa seletividade dos métodos convencionais para diagnóstico e terapia de neoplasias, bem como o fato de nem sempre alcançarem o sucesso terapêutico desejado, configuram dificuldades para a prática oncológica. Diante disso, os anticorpos monoclonais (AcMs) radiomarcados, aplicados em técnicas diagnósticas, têm se destacado, visto que permitem a entrega seletiva da radiação ao alvo de interesse. A metodologia Radioimunodiagnóstico (RID), utilizando AcM anti-EGFR radiomarcado, possibilita triagem prévia, avaliando a resistência ao tratamento e estratificando pacientes que possam apresentar benefícios à imunoterapia com cetuximabe. Além disso, permite monitorar a progressão da terapia, visando tratamento mais efetivo e direcionado, promulgando a abordagem da medicina personalizada. No Brasil, ainda não há radioimunoconjugado disponível para diagnóstico e seguimento do câncer. Nesse contexto, o objetivo com este trabalho foi o de desenvolver uma formulação farmacêutica para padronizar uma rotina de produção dos radiofármacos para radioimunodiagnóstico de câncer de cabeça e pescoço e de câncer colorretal: cetuximabe-DTPA-111In e cetuximabe-DFO-89Zr. Em adição, corroborar na elucidação dos mecanismos de resistência das células tumorais à terapia com o cetuximabe, através da realização de estudos de ligação do radioimunoconjugado à receptores celulares. Em relação aos radiofármacos estudados, destaca-se que os processos de conjugação do cetuximabe com os quelantes DTPA, na razão molar 1:20, e com o DFO, 1:5, foram bem-sucedidos e otimizados, demonstrando boa reprodutibilidade. Os imunoconjugados apresentaram preservação da imunorreatividade e alta estabilidade quando armazenados a -20°C por até seis meses. Esses imunoconjugados, quando radiomarcado com 111In e 89Zr, exibiram pureza radioquímica superior a 95%, sem necessidade de purificação pós-marcação, e estabilidade por tempo que possibilita seu transporte às clínicas distantes do centro produtor. As análises in vitro do cetuximabe-DTPA-111In em células FaDu-C10 (linhagem resistente) demonstraram percentual inexpressivo de ligação e internalização do radioimunoconjugado, congruindo na explanação do modelo de resistência conferido à linhagem. O estudo de corpo inteiro em MicroPET/TC revelou redução no perfil de captação no grupo de bloqueio, com excesso de cetuximabe não marcado, e intensa captação do cetuximabe-DFO-89Zr pelo tumor de células escamosas no grupo sem bloqueador, confirmando a especificidade in vivo do radioimunoconjugado. Os estudos de biodistribuição dos radiofármacos foram compatíveis com os descritos em literatura e validaram os resultados obtidos por imagens em MicroSPECT/TC e MicroPET/TC, além de apresentarem apreciável captação tumoral, considerando os tempos analisados. A estabilidade alta in vivo e a eficácia da marcação foram confirmadas pela baixa captação óssea e em tecidos não alvos. O melhor intervalo pós-injeção do radiofármaco para avaliação in vivo foi após cinco dias da administração. Conclui-se, portanto, que os radioimunoconjugados para imuno-SPECT e imuno-PET, cetuximabe-DTPA-111In e cetuximabe-DFO-89Zr, são ferramentas promissoras para diagnóstico e monitoramento de câncer receptor específico (EGFR) e para estratificação de pacientes à terapia anti-EGFR, encorajando a continuidade deste projeto para futuros estudos clínicos.