RENATA DAMIANI
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Resumo IPEN-doc 16159 International collaborative study to establish the 2nd WHO International Standard of Human Recombinant Fillicle Stimulating Hormone for Bioassai2010 - OLIVEIRA, J.E.; ALMEIDA, B.E.; DAMIANI, R.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.The aim of the International Collaborative Study proposed by the National Institute for Biological Standards and Control (WHO) is to calibrate a new preparation of human follicle stimulating hormone (hFSH) relative to the 1st International Standard for bioassay of recombinant-hFSH (WHO 92/642), which is almost exhausted and requires to be replaced. The candidate preparation and four other samples, which correspond to this preparation stored at elevated temperatures (K, L, M, N), were analyzed qualitatively and quantitatively in our laboratory, by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RPHPLC). The candidate content determined in six assays (8.59 ± 0.41 μg/ampoule) was 20% lower, when compared with the current standard. Based on this, an average value of 110 IU FSH per ampoule could be assigned to this preparation. The main isoform of the candidate preparation showed a lower retention time (22.5 ± 0.83 min) relative to WHO 92/642 (22.8 ± 0.81 min) and also to an internal reference preparation (22.6 ± 0.86 min). These differences, though, were not significant (p>0.05). Practically identical contents were also determined for K, L, M and N ampoules (8.44 ± 0.20; 8.56 ± 0.33; 8.57 ± 0.38; 8.69 ± 0.30 μg/ampoule, respectively). No significant differences in FSH retention times between the candidate preparation and the ampoules stored at elevated temperatures were observed.Dissertação IPEN-doc 14055 Expressao estavel de tireotrofina humana (r-hTSH) em celulas de mamifero (CHO) que expressam 'alfa'2,6-sialiltransferase2009 - DAMIANI, RENATAUma linhagem celular de CHO, previamente modificada geneticamente pela introdução de cDNA da 2,6 sialiltransferase de rato, gerou, pela primeira vez, um hTSH recombinante com sialilação humanizada (hlsr-hTSH), mais similar ao hormônio nativo, com 61% de ligação de ácido siálico na conformação 2,3 e 39%, na conformação 2,6. O clone mais produtivo, quando submetido à amplificação gênica com 8 M de metotrexato, apresentou um nível de secreção de aproximadamente 2 g de hTSH/106 células/dia, nível este útil para a purificação e caracterização do produto. A massa molecular relativa do heterodímero e das subunidades e do hlsr-hTSH purificado, determinada por espectrometria de massa MALDI-TOF, e a hidrofobicidade relativa, determinada por RP-HPLC, não apresentaram diferenças significativas com relação às preparações de hTSH recombinante derivadas de células CHO sem a modificação devida ao gene da 2,6 sialiltransferase. Entretanto, algumas diferenças foram observadas na composição dos N-glicanos, com mais estruturas tri- e tetra-sialiladas no hlsr-hTSH. O hlsr-hTSH mostrou-se eqüipotente (p>0,05) à preparação comercial de r-hTSH (Thyrogen) e 1,5 vezes mais potente do que a preparação nativa de hTSH (p<0,001), quando analisado por um bioensaio in vivo baseado na capacidade do TSH de estimular a liberação de T4.