BEATRIZ ELANE DE ALMEIDA

BEATRIZ ELANE DE ALMEIDA

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RP-HPLC qualitative and quantitative analysis of glycoprotein hormones in the presence of high amounts of human serum albumin: hLH, hCG, hFSH and hTSH
2011 - ALMEIDA, B.E.; OLIVEIRA, J.E.; DAMIANI, R.; DALMORA, S.L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
International collaborative study to establish the 2nd WHO International Standard of Human Recombinant Fillicle Stimulating Hormone for Bioassai
2010 - OLIVEIRA, J.E.; ALMEIDA, B.E.; DAMIANI, R.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
The aim of the International Collaborative Study proposed by the National Institute for Biological Standards and Control (WHO) is to calibrate a new preparation of human follicle stimulating hormone (hFSH) relative to the 1st International Standard for bioassay of recombinant-hFSH (WHO 92/642), which is almost exhausted and requires to be replaced. The candidate preparation and four other samples, which correspond to this preparation stored at elevated temperatures (K, L, M, N), were analyzed qualitatively and quantitatively in our laboratory, by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RPHPLC). The candidate content determined in six assays (8.59 ± 0.41 μg/ampoule) was 20% lower, when compared with the current standard. Based on this, an average value of 110 IU FSH per ampoule could be assigned to this preparation. The main isoform of the candidate preparation showed a lower retention time (22.5 ± 0.83 min) relative to WHO 92/642 (22.8 ± 0.81 min) and also to an internal reference preparation (22.6 ± 0.86 min). These differences, though, were not significant (p>0.05). Practically identical contents were also determined for K, L, M and N ampoules (8.44 ± 0.20; 8.56 ± 0.33; 8.57 ± 0.38; 8.69 ± 0.30 μg/ampoule, respectively). No significant differences in FSH retention times between the candidate preparation and the ampoules stored at elevated temperatures were observed.
Reversed-phase higg-performance liquid chromatography characterization of human menopausal gonadotropin preparations
2010 - ALMEIDA, B.E.; OLIVEIRA, J.E.; DAMIANI, R.; SPIGOTI, G.; DALMORA, S.L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
Complete RP-HPLC analysis of WHO International Standards
2012 - ALMEIDA, B.E.; OLIVEIRA, J.E; DAMIANI, R.; DALMORA, S.L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
Quantitative analysis of different preparations of human thyrotropin (hTSH): a comparison between RP-HPLC and the in vivo bioassay based on thyroxine stimulaton mice
2012 - ALMEIDA, B.E.; DAMIANI, R.; OLIVEIRA, J.E.; RIBELA, M.T.C.P.; BARTOLINI, P.
Determinação de potência de diferentes preparações de foliculotrofina, luteotrofina e tireotrofina: comparação entre a quantificação por cromatografia líquida em fase reversa e por bioensaio in vivo
2013 - ALMEIDA, BEATRIZ E. de
Com a intenção de estabelecer métodos físico-químicos como uma alternativa ao bioensaio in vivo para determinação de atividade biológica, o conteúdo de hFSH, hTSH e hLH de diferentes preparações, nativas e recombinantes, foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e comparado ao dado obtido pelo clássico bioensaio in vivo em camundongos ou ratos (BA). Para estes hormônios foi encontrada uma relação linear entre os dois métodos: hFSH BAUI = 0,9925 RP-HPLCUI - 1,3165, r = 0,9371, p < 0,001, n = 24; hTSH BAμg = 0,9790 RP-HPLCμg - 0,052, r = 0,8725 , p < 0,001, n = 14; hLH BAUI = 0,8771 RP-HPLCUI + 12,41; r = 0,9786, p < 0,01, n = 5. Para outras nove preparações de hFSH e onze preparações de hTSH foi determinada a diferença média (d) entre a bioatividade predita pela RP-HPLC através destas equações e da média das bioatividades obtidas com os dois métodos. Para o hLH não foi possível determinar esta diferença em virtude das poucas amostras disponíveis. No caso do hFSH, d ± DP = -2,11 ± 3,49 % sendo a precisão de 1,16% e no caso do hTSH, d ± DP = -2,01 ± 5,56 % com precisão de 1,68%. Amostras parcialmente alteradas apresentaram diferentes graus de atividade de hFSH, hTSH e hLH que puderam ser preditas por RP-HPLC com uma aceitável concordância com os bioensaios in vivo. Estes resultados demonstraram que o emprego de um ensaio físico-químico sem o uso de animais, tal como a RP-HPLC, é uma alternativa viável ao uso do bioensaio in vivo para a determinação da potência de hFSH e hTSH, reduzindo assim o número de animais em geral utilizados para assegurar a qualidade e eficácia de um produto farmacêutico.
Analise de luteotrofina humana e de gonadotrofina corionica humana, recombinante e natural, por cromatografia liquida de alta eficiencia em fase reversa
2009 - ALMEIDA, BEATRIZ E. de
Neste trabalho foram desenvolvidas condições específicas de RP-HPLC para análise de preparações recombinantes e naturais de hLH, de hCG, e de suas subunidades. O hLH e o hCG heterodimérico e suas subunidades e migraram com tempos de retenção (tR) significativamente diferentes, na seguinte ordem de hidrofobicidade crescente: -hCG < -hLH < hCG < hLH < -hCG < -hLH. Nestas condições, onze preparações foram estudadas: o Padrão Internacional recombinante hLH-WHO 96/602, uma preparação comercial recombinante, duas preparações hipofisárias altamente purificadas de hLH, uma preparação recombinante e duas preparações urinárias de hCG e quatro produtos urinários heterogêneos, contendo hLH + hFSH. Todas as preparações de hLH mostraram um tempo de retenção similar para o pico principal (tR = 38,35 ± 0,42 min; DPR = 1,1 %; n = 4 preparações), enquanto o pico principal do hCG migrou cerca de 4% mais rápido, quando comparado a este valor médio. Picos de hLH, hFSH e hCG foram também identificados nas preparações urinárias heterogêneas. O método foi validado para as sete preparações homogêneas, sendo a exatidão, precisão e sensibilidade calculadas com base na curva dose-resposta, altamente linear (r=0,99998; p<0,0001; n=20). A quantificação de diferentes gonadotrofinas nas preparações heterogêneas foi também realizada, embora com claras limitações de exatidão.
Reversed-phase performance liquid chromatography as an alternative to animal bioassay for human thyrotropin potency determination
2014 - ALMEIDA, B.E.; DAMIANI, R.; OLIVEIRA, J.E.; DALMORA, S.L.; TORJESEN, P.A.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
A pilot study on potency determination of human follicle-stimulating hormone: A comparison between reversed-phase high-performance liquid chromatography method and the vivo bioassay
2011 - ALMEIDA, B.E.; OLIVEIRA, J.E.; DAMIANI, R.; DALMORA, S.L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.
Qualitative and quantitative reversed-phase high performance liquid chromatographic analysis of glycoprotein hormones in the presence of a large excess of human serum albumin
2012 - ALMEIDA, B.E.; OLIVEIRA, J.E.; DAMIANI, R.; DALMORA, S.L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M.T.C.P.