TAIS LIMA DE OLIVEIRA

TAIS LIMA DE OLIVEIRA

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The use of bacterioophage lambda Psub(L) as a constitutive promoter
2006 - HELLER, S.R.; OLIVEIRA, T.L.; UEDA, E.K.; SOUZA, J.M.; OZAKI, N.A.; RIBELA, M.T.C.P.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.S.
Influence of activation temperature on the degradation of recombinant proteins in E.coli
2008 - OLIVEIRA, T.L.; HELLER, S.R.; ARTHUSO, F.; SOARES, C.R.J.; BARTOLINI, P.
Purification and characterization recombinant glycosylated human prolactin synthesized in cho cells
2008 - OLIVEIRA, T.L.; HELLER, S.R.; OLIVEIRA, J.E.; ARTHUSO, F.S.; GOULART, H.R.; SOUSA, J.M.; SUZUKI, M.F.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.S.
Two-step purification of mouse prolactin expressed in the periplasmic space of Escherichia coli
2010 - SUZUKI, MIRIAM F.; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; OLIVEIRA, TAIS L.; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; GOULART, HERBERT R.; CAPONE, MARCOS V.N.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
Expressão de prolactina de camundongos no espaço periplastico de Escherichia coli
2009 - SUZUKI, MIRIAM F.; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; OLIVEIRA, TAIS L.; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.
A prolactina é um neuro hormônio que faz parte da superfamília das citocinas e está envolvida em mais de 300 processos biológicos. Considerando-se a diferença de 41% encontrada na seqüência de aminoácidos da prolactina de camundongo em relação à humana, os experimentos que utilizam a prolactina humana em modelos animais (ratos ou camundongos), podem sofrer interferência de forma decisiva na interpretação dos resultados em estudos de doenças crônicas como o lúpus eritematoso sistêmico e a artrite reumatóide Nesse trabalho introduzimos o cDNA da prolactina de camundongo (mPRL) junto com o gene do peptídio sinalizador DsbA em um cassete de expressão bacteriano desenvolvido em nosso laboratório que utiliza o promotor λPL. Esse plasmídeo foi utilizado para transformar diferentes cepas de Escherichia coli e o clone com expressão periplásmica mais eficiente foi selecionado para estudo de expressão, purificação e caracterização físico-química e biológica da mPRL.
Desenvolvimento de processo de fermentacao em biorreator para producao de prolactina humana secretada no espaco periplasmico de Escherichia coli
2008 - OLIVEIRA, TAIS L. de
A Prolactina (PRL) é um dos hormônios mais versáteis em termos de ação biológica. Sua ação mais conhecida está relacionada com o estímulo da lactação e regulação do crescimento e da diferenciação da glândula mamária; também apresenta importante aplicação diagnóstica. Somando os crescentes estudos sobre suas possíveis aplicações terapêuticas, fica cada vez mais notória a necessidade da obtenção desse hormônio puro, biologicamente ativo e na sua forma autêntica.O objetivo fundamental desse projeto foi a produção de hPRL em escala laboratorial a partir de bactérias (E.coli) modificadas geneticamente, utilizando um sistema de expressão baseado no promotor Lambda () PL, o mesmo utilizado com sucesso em nosso laboratório na expressão do hGH. Descrevemos nesse trabalho um processo de cultivo em biorreator, onde não foi utilizado o repressor cIts, uma proteína termo-sensível que usualmente é utilizada para inibir o funcionamento do promotor PL durante crescimento a 30ºC. O processo de cultivo apresenta basicamente três etapas: na primeira etapa o crescimento é realizado sem adição contínua de nutrientes (cultivo em batch), na segunda etapa ocorre adição contínua de nutrientes e carboidrato (cultivo em fed-batch) e na última etapa é realizada a ativação, caracterizada pelo aumento da temperatura mantendo-se a adição de nutrientes e carboidrato. Esse processo de fermentação rápido e flexível, com duração média de 20 horas, permitiu obter uma biomassa final correspondente à densidade óptica de aproximadamente 30 A600nm (unidades ópticas de absorbância em 600nm) e com uma expressão da ordem de 1g de hPRL mL-1 A600 -1, as mais altas já relatadas para secreção de prolactina no espaço periplásmico. A hPRL monomérica foi purificada e caracterizada por métodos físico-químicos e biológicos, os quais confirmaram a sua atividade biológica e imunológica, o seu correto processamento e uma massa molecular relativa (Mr) de 22.906.