JOSÉ MARIA SOUZA
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Resumo IPEN-doc 11434 The use of bacterioophage lambda Psub(L) as a constitutive promoter2006 - HELLER, S.R.; OLIVEIRA, T.L.; UEDA, E.K.; SOUZA, J.M.; OZAKI, N.A.; RIBELA, M.T.C.P.; BARTOLINI, P.; SOARES, C.R.S.Resumo IPEN-doc 15978 Two-step purification of mouse prolactin expressed in the periplasmic space of Escherichia coli2010 - SUZUKI, MIRIAM F.; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; OLIVEIRA, TAIS L.; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; GOULART, HERBERT R.; CAPONE, MARCOS V.N.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.Resumo IPEN-doc 11011 Reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) analysis and hydrophobicity studies of recombinant human pituitary hormones synthesized in E. coli and CHO cells2005 - RIBELA, M.T.C.P.; CARVALHO, C.M.; HELLER, S.R.; LOUREIRO, R.F.; OLIVEIRA, J.E.; OZAKI, N.A.; PERONI, C.N.; SOARES, C.R.J.; SOUZA, J.M.; UEDA, E.K.; BARTOLINI, P.The synthesis and laboratory production of human growth hormone (hGH) and prolactin (hPRL) have been carried out in genetically modified E. coli, while those of thyroid stimulating hormone (hTSH) and of two analogs antagonists of hPRL (G129RhPRL and S179D-hPRL) in stably transfected CHO cells. Human follicle stimulating hormone (hFSH) and luteinizing hormone (hLH) have not been synthesized yet in our laboratory but their HPLC analytical methodologies are under development. For the purpose of studying and improving synthesis and bioreaction yields and, at the same time, planning and following all subsequent purification steps, novel RP-HPLC methods have been set up for each hormone. For hGH and hPRL, isocratic RP-HPLC methods have been developed that can qualitatively and quantitatively analyze the two hormones directly in osmotic shock fluids, already during fermentation. For hTSH, hFSH and hLH, RP-HPLC gradient elutions have been set for the analysis of these hormones in their purified form and in CHO conditioned medium. For these three glycoproteins hydrophobicities have been compared and the following order established: hLH>hTSH>hFSH. An analogous hydrophobicity index has been also determined for hPRL and its analogs, being G129R-hPRL>hPRL>S179D-hPRL. Still concerning hFSH, for the first time it has been possible to optimize RP-HPLC elution conditions that are able to preserve its undissociated heterodimeric structure. Thanks to this tool it was thus possible to carry out a comparative study on pituitary, urinary and CHO-derived hFSH preparations, revealing differences that are probably due to the carbohydrate moiety, as already observed for hTSH. Classical highperformance size exclusion chromatography (HPSEC) together with MALDI-TOF-MS analysis was also employed along with these studies, to complement physico-chemical characterization of our proteins of interest.Resumo IPEN-doc 06990 Hollow fiber bioreactors for hormone production in CHO cells2000 - SOARES, C.R.J.; PERONI, C.N.; MORGANTI, L.; AFFONSO, R.; ARKATEN, R.R.; SOUZA, J.M.; BARTOLINI, P.Artigo IPEN-doc 14342 Produção em escala laboratorial de prolactina humana em células CHO adaptadas para o crescimento em suspensão2009 - ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SUZUKI, MIRIAM F.; GOULART, HERBERT R.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; DAMIANI, RENATA; OLIVEIRA, TAIS L.; CAPONE, MARCOS V.N.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.O Grupo de Hormônios do Centro de Biotecnologia do IPEN tem desenvolvido várias linhagens de células de ovário de hamster chinês (CHO) modificadas geneticamente e comprovadamente eficientes na expressão de proteínas heterólogas, dentre elas a prolactina humana (hPRL). No entanto, todas as nossas linhagens são cultivadas aderidas e dependentes da presença de soro fetal bovino (SFB) no meiode cultivo para um crescimento eficiente. Nesse trabalho foi realizada a adaptação da nossa linhagem produtora de hPRL para o crescimento em suspensão e na ausência de SFB. As células em suspensão apresentam um grande interesse industrial-farmacêutico, tanto pela facilidade de cultivo e ampliação de escala, como pela produtividade volumétrica. Os estudos para adaptação dessas células foram realizados com base no protocolo descrito por Sinacore e colaboradores (2000). Desta forma foi realizada uma produção laboratorial de hPRL em frascos "spinner" por 30 dias consecutivos, assim com, a sua purificação e caracterização.Artigo IPEN-doc 14128 Expressão de prolactina de camundongos no espaço periplastico de Escherichia coli2009 - SUZUKI, MIRIAM F.; ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; OLIVEIRA, TAIS L.; OLIVEIRA, NELIO A. de J.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.A prolactina é um neuro hormônio que faz parte da superfamília das citocinas e está envolvida em mais de 300 processos biológicos. Considerando-se a diferença de 41% encontrada na seqüência de aminoácidos da prolactina de camundongo em relação à humana, os experimentos que utilizam a prolactina humana em modelos animais (ratos ou camundongos), podem sofrer interferência de forma decisiva na interpretação dos resultados em estudos de doenças crônicas como o lúpus eritematoso sistêmico e a artrite reumatóide Nesse trabalho introduzimos o cDNA da prolactina de camundongo (mPRL) junto com o gene do peptídio sinalizador DsbA em um cassete de expressão bacteriano desenvolvido em nosso laboratório que utiliza o promotor λPL. Esse plasmídeo foi utilizado para transformar diferentes cepas de Escherichia coli e o clone com expressão periplásmica mais eficiente foi selecionado para estudo de expressão, purificação e caracterização físico-química e biológica da mPRL.Artigo IPEN-doc 17663 Influência de meios de cultivo comerciais na produção laboratorial de prolactina humana sintetizada por células CHO cultiadas em suspensão2011 - ARTHUSO, FERNANDA dos S.; SUZUKI, MIRIAM F.; SOUZA, JOSE M.; OLIVEIRA, JOAO E.; CAPONE, MARCOS V.N.; BARTOLINI, PAOLO; SOARES, CARLOS R.J.