Análise antivenômica de segunda geração para avaliação do perfil imunológico de venenos elapídicos

Abstract

Apesar de representarem pequena parcela dos acidentes ofídicos ocorridos no Brasil, as serpentes do gênero Micrurus apresentam grande importância médica e epidemiológica, devido à elevada letalidade de seu veneno, que tem como componentes predominantes as fosfolipases A2 (PLA2) e as toxinas three finger (3FTx) neurotóxicas. O único tratamento específico para o envenenamento é a administração de soro antielapídico, cuja formulação brasileira se baseia nos venenos de M. corallinus e M. frontalis. Esse produto, contudo, apresenta reduzida eficácia na neutralização do veneno de corais que habitam outras regiões do país além do Sudeste. Estudos anteriores mostraram a capacidade de um soro comercial pentavalente, baseado em elapídeos australianos, de neutralizar in vivo os venenos de Micrurus que não são neutralizados pelo soro brasileiro. Neste trabalho, foi avaliada a imunorreatividade de ambas a formulações frente ao veneno de M. lemniscatus, utilizando-se da plataforma de antivenômica de segunda geração, baseada na combinação de cromatografia por imunoafinidade com análise proteômica por espectrometria de massas e aplicação de ferramentas da bioinformática. Dessa forma, puderam ser caracterizadas as toxinas reconhecidas por ambos os soros, bem como as toxinas que conferem ao soro australiano a capacidade de neutralização mais abrangente. Os ensaios de antivenômica foram realizados através de duas marchas analíticas. Na primeira, o veneno de M. lemniscatus foi aplicado em coluna com soro brasileiro (BUT) acoplado; a fração cromatográfica não retida foi então injetada em coluna com soro australiano (CSL). Na segunda marcha, o veneno foi aplicado separadamente nas colunas BUT e CSL. Verificou-se que entre um quarto e metade do proteoma do veneno de M. lemniscatus consiste de proteínas não atribuídas a toxinas. Considerando-se apenas o conjunto de toxinas no veneno, predominam 3FTx, L-aminoácido oxidases (LAO), PLA2 e inibidores de proteases. Dentre as toxinas reconhecidas por ambos os soros, predominam as 3FTx, igualmente abundantes nos venenos de M. lemniscatus, M. frontalis e M. corallinus. O reconhecimento exclusivo pelo soro australiano abrangeu 3FTx, PLA2, LAO, lectinas, inibidores de proteases do tipo Kunitz, serinoproteases, disintegrinas e metaloproteases, toxinas que conferem ao soro australiano capacidade de neutralização mais abrangente em relação ao soro brasileiro. O padrão de reconhecimento exclusivo pelo soro australiano é caracterizado por toxinas homólogas presentes tanto em Micrurus que habitam a América do Norte e Central e bacia amazônica, quanto em elapídeos asiáticos e da Oceania. Portanto, a abrangência limitada do soro brasileiro pode ser devida à ausência daquelas toxinas da mistura antigênica utilizada na produção do soro. Outro fator limitante da abrangência é a reduzida imunogenicidade das toxinas 3FTx, exemplificada pelo não reconhecimento da Frontoxina I de M. frontalis pelo soro brasileiro. Há indícios de que a diferença entre os soros australiano e brasileiro quanto à capacidade de soroneutralização se deva principalmente as suas composições qualitativas.