Determinação de endotoxina bacteriana (pirogênio) em radiofármacos pelo método de formação de gel. Validação

Abstract

Antes do Ensaio do Lisado de Amebócitos do Limulus (LAL), a única forma de se avaliar a pirogenicidade em drogas parenterais e dispositivos médicos era o ensaio de pirogênio em coelhos da Farmacopéia Americana (USP). Especialmente para radiofármacos, o ensaio LAL é a escolha para a determinação de endotoxina bacteriana (pirogênio). O objetivo deste trabalho foi validar o método de formação de gel para alguns radiofármacos sem uma interferência mensurável. O guia do método LAL do Food and Drug Administration (FDA) define interferência como uma condição que causa uma diferença significativa entre os pontos finais de gelificação das séries de controle positivo da água e controle positivo do produto utilizando-se um endotoxina padrão. Os experimentos foram realizados de acordo com o teste de endotoxinas bacterianas da USP na m-iodobenzilguanidina-131I, nos radioisótopos Gálio-67 e Tálio-201, nos reagentes liofilizados DTPA, Fitato, GHA, SAH e Sn Coloidal. A Máxima Diluição Válida (MDV) foi calculada para cada produto com base na sua dose clínica e diluições seriadas abaixo da MDV foram avaliadas em duplicata para a detecção de interferências. A sensibilidade declarada do reagente de LAL foi de 0,125 UE mL-1 (Unidades de Endotoxina por mililitro). Para a validação, uma série de diluições foi feita utilizando-se padrão de endotoxina (PE) nas concentrações de 0,5 a 0,03 UE mL-1 para a confirmação da sensibilidade do reagente de LAL, em quadruplicata. A mesma série de diluições foi feita com o PE e o produto diluído 100 vezes em três lotes consecutivos de cada radiofármaco. Os produtos m-iodobenzilguanidina-131I, Gálio-67, Tálio-201, DTPA, SAH e Sn Coloidal foram compatíveis com o método no fator de diluição 1:100. Fitato e GHA apresentaram interferência no ensaio de formação de gel. Outras técnicas para determinar endotoxinas como o ensaio cromogênico (desenvolvimento de cor) e o turbidimétrico (desenvolvimento de turbidez) foram avaliadas para obter informações qualitativas e quantitativas sobre as concentrações de endotoxinas nas amostras.