Resposta imune frente a bothropstoxina-1 irradiada com sup(60)Co: edentificacao das principais citocinas envolvidas e a participacao de substancias scavengers

Abstract

Considerando os efeitos da radiação gama sobre proteínas e a capacidade do sistema imune de reconhecer macromoléculas modificadas, decidimos pesquisar as principais citocinas envolvidas no padrão de resposta de células Th1 ou Th2 em camundongos (B10.PL, BALB/c ou Knockout-IFN-/-) imunizados com a Bothropstoxina-1 (BTHX-1), uma miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Para avaliar prováveis modificações estruturais na molécula da proteína após o processo de irradiação (radiação de 60Co), foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 15% para a BTHX-1, na forma nativa e irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Os resultados mostraram que a radiação foi capaz de promover alterações na molécula da BTHX-1. Na presença dos scavengers, mesmo após a irradiação da toxina, houve a preservação da banda principal (14 kDa). Com relação aos aspectos imunológicos, foram realizados ensaios de produção e identificação de anticorpos, nos quais, os animais foram imunizados com a BTHX-1, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não dos scavengers. Observou-se que a proteína nativa induziu, preferencialmente, uma resposta do tipo Th2, enquanto que a proteína irradiada induziu uma resposta do tipo Th1. A toxina irradiada na presença do tbutanol induziu menor produção de IgG2b, quando comparada a toxina irradiada sem scavengers. Para a quantificação da expressão de citocinas em células esplênicas obtidas dos camundongos, foi realizado o Real-time PCR para a detecção das citocinas IFN-, IL-2, IL- 4 e IL-10. As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 nativa e estimuladas in vitro com a toxina irradiada, apresentaram maior expressão de IFN- e IL-2 (padrão de resposta Th1). As células dos Knockout-IFN-/- imunizados com a BTHX-1 nativa apresentaram maior expressão de IL-4 (padrão de resposta Th2). As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 + t-butanol apresentaram maior expressão de IL-4 e IL-10, respectivamente. Estes fatos reforçam a participação do OH na modulação da resposta imune contra a toxina irradiada.