Aplicação da terapia fotodinâmica com uso do LED e azul de metileno em Streptococcus mutans

Abstract

Introdução: Streptococcus mutans é considerado como colonizador primário para o desenvolvimento da cárie dentária. As propriedades cariogênicas de S. mutans são reguladas por diversos genes, envolvidos em vias metabólicas essenciais: adesão microbiana, formação do biofilme, síntese de polissacarídeo extracelular, captação de carboidratos e tolerância ao ácido. S. mutans normalmente habita um biofilme complexo. A bactéria produz uma grande quantidade de exopolissacarídeos, principalmente na presença da glicose facilitando o processo de adesão e ativando bombas de transporte que podem facilitar a entrada aumentando o acúmulo do fotossensibilizador dentro da célula [1]. A terapia fotodinâmica envolve a utilização de um fotossensibilizador (FS), que é absorvido por células específicas seguida de irradiação com luz visível, resultando na morte celular [2]. Este trabalho tem o objetivo de investigar a morte celular do Streptococcus mutans após a terapia fotodinâmica com azul de metileno e LED com e sem glicose. Material e Metodologia: Neste trabalho o Streptococcus mutans foi cultivado em microaerofilia em ágar infusão de cérebro e coração (BHI) incubado a 37o por 48 horas. Os inóculos foram preparados com a coleta de colônias puras que foram suspensas em solução salina fosfatada tamponada (PBS) com e sem 50 mM de glicose. O fotossensibilizador azul de metileno foi adicionado à suspensão proporcionando a concentração final de 100 μM. Todos os experimentos foram realizados com 6 grupos diferentes (grupo controle; grupo irradiado com LED sem FS; grupo FS sem irradiação; e grupos PDT). Os tempos de irradiação do grupo PDT foram de 30,, 60 e 120 segundos. Os resultados foram submetidos à análise estatística com teste de variância one-way (ANOVA). A comparação entre as médias foi realizada pelo teste de Tukey e a significância foi ajustada em 5%. Resultados: A irradiação somente com luz não apresentou morte celular, assim como o fotossensibilizador não apresentou toxicidade no escuro, pois, o grupo controle não apresentou diferenças significativas quando comparado com os grupos luz e fotossensibilizador em todos os experimentos com e sem glicose. Em contrapartida nos experimentos sem glicose a PDT provocou morte celular proporcional a quantidade de luz empregada. Quanto maior a exposição radiante, maior foi a inativação do S. mutans. Após 2 min. de irradiação observamos redução de 100% das bactérias, apresentando uma redução de 7 ordens de grandeza em relação ao grupo controle. Nos experimentos com glicose não foi observada morte celular mesmo aumentando a exposição radiante após 2 min. de irradiação. Conclusão: Podemos concluir que a PDT é uma solução viável para inativação de S. mutans em suspensão, e que a presença da glicose reduz drasticamente o efeito da PDT..