Alteração da susceptibilidade de C. albicans resistente ao fluconazol após terapia fotodinâmica

Abstract

Introdução: As doenças infecciosas causadas por fungos ainda representam um grande desafio para os profissionais de saúde e a comunidade científica, especialmente as infecções causadas por micro-organismos resistentes aos fármacos antifúngicos convencionais. Novas alternativas de tratamento foram estudadas, entre elas a terapia fotodinâmica (PDT) que surgiu como uma promissora modalidade terapêutica por causar a morte de micro-organismos a partir da associação de um fotossensibilizador e luz. Recentemente observamos que a PDT realizada em condições subletais aumenta a suscetibilidade do fungo Candida albicans ao fluconazol [1]. Dando continuidade a este estudo iniciamos a investigação em C. albicans que apresentam diferentes mecanismos de resistência aos antifúngicos. Assim, o presente trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito antimicrobiano da associação de PDT e fluconazol em C. albicans que apresenta um sistema de efluxo responsável pela resistência ao antifúngico. Materiais e Métodos: Para a realização deste trabalho foi utilizado C. albicans YEM 13, uma cepa com expressão exacerbada de bomba de efluxo da família MFS (Major Facilitator Superfamily). As células foram submetidas a PDT com azul de metileno na concentração final de 50 μM e irradiadas com parâmetros subletais (=660 nm, 75 mW/cm2, 4 min)[1]. Para investigar a atividade antimicrobiana do fluconazol foram determinados os valores de concentração mínima inibitória (CMI) do crescimento celular. A CMI foi determinada pelo método de microdiluição em caldo de acordo com as normas estabelecidas pelo Comitê Europeu de Teste à Susceptibilidade Antimicrobiana (EUCAST)[2]. A solução de fluconazol (Sigma Aldrich, São Paulo, Brasil) foi preparada, considerando a potência do fármaco de 98% e a faixa de concentrações testadas foi de 0,125-64 μg/mL. Os valores de CMI foram determinados por meio da leitura da absorção em 530 nm, em espectrofotômetro (SpectraMax M4, Molecular Devices, EUA). Para cada grupo foi determinada a menor concentração da droga que promoveu a inibição ≥ 50% do crescimento em comparação ao controle livre de drogas. Foram avaliadas células C. albicans YEM 13 sem tratamento e previamente submetidas a PDT subletal. Foi utilizado como controle a cepa de C. albicans ATCC 90028 que não apresenta resistência ao fluconazol. Resultados: C. albicans ATCC 90028 apresentou valor de CMI de 0,5 μg/mL, dado compatível com os descritos na literatura. As amostras de célula YEM 13 que não foram submetidas à PDT apresentaram o valor de CMI de 64 μg/mL, que também coincide com o valor descrito na literatura [3]. Estes dados demonstram que a cepa YEM 13 apresenta um valor de CMI 128 vezes superior ao de uma cepa suscetível ao fluconazol (ATCC 90028). Confirmando nossa hipótese, o fluconazol foi mais ativo em C. albicans submetida previamente à PDT subletal. Dentro da faixa de 0,125-64 μg/mL, houve maior inibição do crescimento celular quando previamente submetido à PDT, resultando na redução do valor de CMI de 64 μg/mL para 32 μg/mL. Conclusões: Foi possível demonstrar que a PDT pode aumentar a susceptibilidade ao fluconazol em cepa de C. albicans que apresentam bombas de efluxo da família MFS. Estes resultados preliminares sugerem que a associação terapêutica entre a PDT e o fluconazol pode ser uma importante alternativa no tratamento de infecções por cepas de C. albicans que apresentam resistência a este antifúngico. Vale ressaltar que neste trabalho foram utilizadas condições subletais e resultados ainda mais promissores podem ser obtidos com a otimização dos parâmetros de irradiação.